| 内容提要 | 第1-9页 |
| 第一章 前言 | 第9-27页 |
| ·人白介素-18 的研究背景 | 第9-13页 |
| ·白介素概述 | 第9页 |
| ·白介素-18 的发现 | 第9-10页 |
| ·人白介素-18 的分子特性 | 第10页 |
| ·人白介素的作用途径及方式 | 第10页 |
| ·人白介素-18 的生物学活性 | 第10-12页 |
| ·人白介素-18 与疾病的关系 | 第12-13页 |
| ·人白介素-18 的应用前景 | 第13页 |
| ·基因合成的研究背景 | 第13-20页 |
| ·基因合成方法的建立 | 第13-14页 |
| ·化学法合成目的基因的基本原理 | 第14页 |
| ·化学法合成目的基因的常用方法及特点 | 第14-16页 |
| ·酶促合成目的基因 | 第16-17页 |
| ·PCR 技术实现DNA 的拼接 | 第17-19页 |
| ·基因合成中避免碱基错配的措施 | 第19-20页 |
| ·外源基因在大肠杆菌中表达的影响因素 | 第20-24页 |
| ·表达载体的选择 | 第20-21页 |
| ·密码子的选择 | 第21-22页 |
| ·mRNA 的一级、二级结构和mRNA 的稳定性 | 第22-23页 |
| ·宿主的选择和培养条件的优化 | 第23-24页 |
| ·本研究立题依据与意义 | 第24-26页 |
| ·研究意义 | 第24-25页 |
| ·立题依据 | 第25-26页 |
| ·创新点 | 第26页 |
| ·实验设计路线 | 第26-27页 |
| 第二章 人白介素-18 的基因克隆 | 第27-43页 |
| ·仪器与试剂 | 第27-29页 |
| ·主要仪器与设备 | 第27页 |
| ·主要试剂与材料 | 第27-29页 |
| ·实验方法 | 第29-36页 |
| ·hIL-18 基因密码子优化与设计 | 第29-30页 |
| ·寡核苷酸的拆分及合成 | 第30页 |
| ·两步法合成目的基因 | 第30-32页 |
| ·双酶切与连接反应 | 第32页 |
| ·重组子转化及筛选 | 第32-34页 |
| ·阳性克隆鉴定及测序 | 第34页 |
| ·pET32a(+)/hIL-18 表达载体的构建 | 第34-36页 |
| ·实验结果 | 第36-42页 |
| ·密码子优化 | 第36-37页 |
| ·两步法合成目的基因 | 第37-38页 |
| ·白斑提取质粒的鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒测序结果 | 第39-40页 |
| ·序列全正确hIL-18 基因的扩增 | 第40-42页 |
| ·本章小结 | 第42-43页 |
| 第三章 人白介素-18 的表达、纯化与鉴定 | 第43-59页 |
| ·仪器与试剂 | 第43-45页 |
| ·主要仪器与设备 | 第43页 |
| ·主要试剂与材料 | 第43-45页 |
| ·实验方法 | 第45-49页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第45页 |
| ·SDS-PAGE 对表达蛋白的定性、定量分析 | 第45-46页 |
| ·诱导时间对hIL-18 表达的影响 | 第46页 |
| ·IPTG 浓度对hIL-18 表达的影响 | 第46页 |
| ·培养温度对hIL-18 表达的影响 | 第46页 |
| ·表达蛋白可溶性分析 | 第46-47页 |
| ·目标蛋白的Western-Blot 分析 | 第47页 |
| ·Folin-酚法测定蛋白 | 第47页 |
| ·hIL-18 的ELISA 检测 | 第47-48页 |
| ·hIL-18 蛋白的纯化 | 第48页 |
| ·融合蛋白的切除 | 第48-49页 |
| ·实验结果 | 第49-57页 |
| ·诱导时间对hIL-18 表达量的影响 | 第49-50页 |
| ·IPTG 浓度对hIL-18 表达量的影响 | 第50-52页 |
| ·培养温度对hIL-18 表达量的影响 | 第52-53页 |
| ·表达蛋白可溶性分析 | 第53-54页 |
| ·目的蛋白的Western-Blot 分析 | 第54页 |
| ·Folin-酚法测定总蛋白质含量 | 第54-55页 |
| ·hIL-18 的ELISA 检测 | 第55-56页 |
| ·hIL-18 的纯化 | 第56-57页 |
| ·纯化hIL-18 成熟肽 | 第57页 |
| ·本章小结 | 第57-59页 |
| 第四章 人白介素-18 生物学活性的初步研究 | 第59-64页 |
| ·仪器与试剂 | 第59-60页 |
| ·主要仪器与设备 | 第59页 |
| ·主要试剂与材料 | 第59-60页 |
| ·实验方法 | 第60-61页 |
| ·获取小鼠脾细胞 | 第60页 |
| ·小鼠脾细胞检测人白介素-18 方法的建立 | 第60页 |
| ·ELISA 法检测小鼠IFN-γ | 第60页 |
| ·小鼠IFN-γ分泌量与hIL-18 的相关性 | 第60-61页 |
| ·实验结果 | 第61-63页 |
| ·小鼠脾细胞检测人白介素-18 方法的建立 | 第61-62页 |
| ·ELISA 法检测小鼠IFN-γ | 第62页 |
| ·不同剂量hIL-18 诱导小鼠脾细胞产生的IFN-γ | 第62-63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 第五章 总结和展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 攻读硕士期间发表的学术论文及其他成果 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 中文摘要 | 第72-74页 |
| Abstract | 第74-75页 |