| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-13页 |
| 前言 | 第13-15页 |
| 第一部分 文献综述 | 第15-45页 |
| 第一章 禽流感病毒病原学及流行病学研究 | 第15-35页 |
| 1 流感病毒(IV)概述 | 第15-17页 |
| ·流感病毒的分类 | 第15页 |
| ·流感病毒的形态与结构 | 第15-17页 |
| 2 禽流感病毒(AIV)病原学特点 | 第17-28页 |
| ·AIV的分类与命名 | 第17-18页 |
| ·AIV的理化特性 | 第18页 |
| ·AIV的基因组及其编码蛋白质 | 第18-28页 |
| ·编码血凝素(Hemagglutinin,HA)基因及其蛋白质 | 第18-20页 |
| ·NA基因及其编码的神经氨酸酶 | 第20-21页 |
| ·编码核衣壳蛋白(Nucleoprotein,NP)基因及核蛋白 | 第21-22页 |
| ·M基因及编码的基质蛋白 | 第22-24页 |
| ·其他基因片段及编码蛋白 | 第24-25页 |
| ·AIV的复制分子机制与基因遗传变异性 | 第25-28页 |
| 3 H5N1亚型禽流感流行现状 | 第28-32页 |
| ·H5N1禽流感在禽类中流行现状 | 第28-30页 |
| ·H5N1禽流感病毒在候鸟中的流行 | 第30页 |
| ·H5N1禽流感病毒对哺乳动物的感染 | 第30-31页 |
| ·H5N1禽流感病毒对人的感染 | 第31-32页 |
| 4 H5N1亚型流感病毒的进化 | 第32-33页 |
| 5 结语 | 第33-35页 |
| 第二章 核酸疫苗的研究进展 | 第35-45页 |
| 1 核酸疫苗概述 | 第35-36页 |
| 2 核酸疫苗的发展简史 | 第36-37页 |
| 3 核酸疫苗的免疫机理 | 第37-38页 |
| 4 增强核酸疫苗免疫效果的方法 | 第38-42页 |
| ·目的基因的选择 | 第38-39页 |
| ·构建高效表达的重组质粒 | 第39页 |
| ·接种组织的预处理 | 第39-40页 |
| ·免疫途径、免疫剂量和免疫次数 | 第40页 |
| ·免疫增强剂和佐剂 | 第40-42页 |
| 5 核酸疫苗在畜禽领域的研究进展 | 第42-44页 |
| 6 核酸疫苗存在的问题与展望 | 第44-45页 |
| 第二部分 研究内容 | 第45-74页 |
| 实验一 虎源H5N1亚型流感病毒HA与NP基因的克隆、测序及其核酸疫苗的构建 | 第45-66页 |
| 1 材料与方法 | 第45-54页 |
| ·材料 | 第45-46页 |
| ·病毒株、细胞株、工程细菌和质粒 | 第45页 |
| ·主要试剂 | 第45-46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·实验方法 | 第46-54页 |
| ·感受态菌的制备(CaCl2转化法) | 第46页 |
| ·质粒DNA的小量制备(碱裂解法) | 第46页 |
| ·质粒DNA的大量制备(碱裂解法) | 第46-47页 |
| ·连接物的转化 | 第47页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳 | 第47-48页 |
| ·总RNA的提取 | 第48页 |
| ·HA和NP基因的扩增、克隆及测序 | 第48-49页 |
| ·核酸疫苗真核表达载体pVAX-HA和pVAX-NP的构建 | 第49-50页 |
| ·核酸疫苗真核表达载体pIRES2-IL-18-HA和pIRES2-IL-18-NP的构建 | 第50-52页 |
| ·所构建的四种真核表达质粒在真核细胞中的表达及检测 | 第52-54页 |
| 2 结果 | 第54-63页 |
| ·A/Tiger/Harbin/132/2007 HA和NP基因的PCR扩增、克隆和测序分析 | 第54-57页 |
| ·pVAX-HA和pVAX-NP真核表达载体的构建及鉴定 | 第57页 |
| ·pIRES2-IL-18-HA和pIRES2-IL-18-NP真核表达载体的构建及鉴定 | 第57-60页 |
| ·猫IL-18基因的PCR扩增、克隆和测序分析 | 第57-58页 |
| ·pIRES2-IL-18载体的构建及鉴定 | 第58-59页 |
| ·pIRES2-IL-18-HA和pIRES2-IL-18-NP真核表达载体的构建及鉴定 | 第59-60页 |
| ·所构建的四种真核表达质粒在BHK-21细胞中的表达和检测 | 第60-63页 |
| ·间接免疫荧光检测结果 | 第60-61页 |
| ·间接ELISA检测结果 | 第61-62页 |
| ·猫IL-18基因在真核细胞中的表达检测结果 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-65页 |
| ·目的基因的选择 | 第63-64页 |
| ·毒株的选折 | 第64页 |
| ·核酸疫苗表达载体的选择 | 第64-65页 |
| 4 小结 | 第65-66页 |
| 实验二 核酸疫苗的小鼠免疫与攻毒保护性试验 | 第66-74页 |
| 1 材料与方法 | 第66-68页 |
| ·材料 | 第66页 |
| ·毒株与质粒 | 第66页 |
| ·实验动物及主要试剂 | 第66页 |
| ·方法 | 第66-68页 |
| ·pVAX-HA、pVAX-NP、pIRES2-IL-18-HA和pIRES2-IL-18-NP的制备 | 第66页 |
| ·小鼠分组与免疫 | 第66-67页 |
| ·攻毒 | 第67页 |
| ·免疫小鼠血清抗AIV抗体的检测 | 第67页 |
| ·免疫小鼠抗AIV细胞免疫水平的检测(淋巴细胞转化实验MTT法) | 第67-68页 |
| 2 结果 | 第68-71页 |
| ·抗AIV抗体水平检测结果 | 第68页 |
| ·抗AIV ELISA抗体水平检测结果 | 第68页 |
| ·抗AIV HI抗体检测结果 | 第68页 |
| ·免疫小鼠的脾淋巴细胞转化试验检测结果 | 第68-69页 |
| ·攻毒保护性试验结果 | 第69-71页 |
| ·攻毒后的临床表现 | 第69-70页 |
| ·核酸疫苗保护率结果 | 第70-71页 |
| 3 讨论 | 第71-73页 |
| ·AIV核酸疫苗的免疫效果分析 | 第71-73页 |
| ·不同载体核酸疫苗免疫效果的差异 | 第71页 |
| ·不同目的基因核酸疫苗免疫效果的差异 | 第71页 |
| ·联合免疫与单独免疫效果的差异 | 第71-72页 |
| ·关于HI试验结果 | 第72页 |
| ·核酸疫苗免疫效果的总体评价 | 第72-73页 |
| ·免疫实验总结与后续工作展望 | 第73页 |
| 4 小结 | 第73-74页 |
| 结论 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-83页 |
| 致谢 | 第83页 |
