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绒山羊皮肤干细胞定位、迁移及次级毛囊生长期差异表达基因文库的构建与筛选

摘要第1-6页
 Abstract第6-14页
1 引言第14-47页
   ·皮肤和毛囊的基本结构第14页
   ·哺乳动物毛囊的胚胎发生与分子调控第14-18页
     ·哺乳动物毛囊的胚胎发生第14-16页
     ·哺乳动物毛囊形态发生相关的信号分子第16-18页
   ·毛囊的周期性变化与分子调控第18-21页
     ·毛囊的周期性第18-20页
     ·毛囊周期性变化的分子调控第20-21页
   ·绒山羊绒毛生长发育研究现状第21-25页
     ·绒山羊毛被特点第22页
     ·内蒙古绒山羊皮肤和毛囊的结构特征第22页
     ·内蒙古绒山羊皮肤和毛囊的形态发生第22-23页
     ·内蒙古绒山羊毛囊的周期性变化第23页
     ·绒山羊绒毛生长调控研究第23-25页
   ·皮肤干细胞研究进展第25-38页
     ·皮肤干细胞的定义及其生物学特性第25-26页
     ·皮肤干细胞的表面标志分子第26-28页
     ·皮肤干细胞的分布位置第28-29页
     ·皮肤干细胞的分离第29-30页
     ·微环境对皮肤干细胞增殖分化的调控第30-37页
     ·皮肤干细胞的可塑性第37-38页
     ·皮肤干细胞的应用第38页
   ·筛选差异表达基因的研究进展第38-42页
     ·基因水平筛选差异基因第39-41页
     ·蛋白质水平筛选差异基因第41-42页
   ·生物信息学的分析方法第42-46页
     ·生物信息学常用数据库第42-43页
     ·生物信息学的基本研究内容第43-44页
     ·生物信息学研究热点第44-45页
     ·生物信息学的发展趋势第45页
     ·生物信息学的应用第45-46页
   ·本研究的目的与意义第46-47页
2 研究一 绒山羊皮肤干细胞定位、迁移的初步研究第47-65页
   ·实验材料第47-49页
     ·实验试剂与药品第47页
     ·实验仪器与设备第47页
     ·主要液体的配制第47-48页
     ·实验动物第48-49页
   ·实验方法第49-52页
     ·BRDU 活体标记第49页
     ·绒山羊皮肤组织石蜡切片的制作第49页
     ·SAPIC法染色第49页
     ·HE 染色第49页
     ·免疫组织化学S-P 法检测BRDU第49-51页
     ·BRDU 标记滞留细胞的体外分离培养及初步鉴定第51-52页
   ·结果第52-59页
     ·皮肤切片的SAPIC法染色和HE 染色第52-53页
     ·BRDU 标记细胞的分布第53-56页
     ·BRDU 标记滞留细胞的体外分离培养及初步鉴定第56-59页
     ·绒山羊皮肤干细胞的定位第59页
   ·讨论第59-64页
     ·BRDU 标记绒山羊皮肤组织的体会第59-62页
     ·绒山羊初级、次级毛囊体外分离的体会第62-63页
     ·BRDU 标记绒山羊皮肤干细胞的可行性第63-64页
   ·小结第64-65页
3 研究二 绒山羊次级毛囊重建前后差异表达基因CDNA 文库的构建及评价第65-84页
   ·实验材料第65-66页
     ·实验试剂与药品第65-66页
     ·实验仪器与设备第66页
     ·实验动物第66页
   ·实验方法第66-73页
     ·绒山羊生长期和休止期次级毛囊的分离第66页
     ·生长期和休止期次级毛囊总RNA 的提取第66-67页
     ·次级毛囊总RNA 的检测第67页
     ·RNA 溶液的保存第67页
     ·CDNA 的合成第67-69页
     ·RSA I 酶切及其效率验证第69页
     ·接头连接第69-70页
     ·第一次消减杂交第70页
     ·第二次消减杂交第70-71页
     ·第一次PCR 扩增第71页
     ·第二次PCR 扩增第71-72页
     ·PCR 产物纯化第72页
     ·PCR 产物与质粒载体连接与转化第72页
     ·单克隆检测第72-73页
   ·结果第73-77页
     ·绒山羊次级毛囊消减文库构建策略第73页
     ·次级毛囊总RNA 的产量和纯度鉴定第73-75页
     ·SMART CDNA 的合成第75-76页
     ·RSAI 酶切效果验证第76页
     ·消减杂交前后的第二次PCR 产物的检测第76页
     ·差异表达基因CDNA 片段的T/A 克隆第76-77页
     ·差异表达基因 CDNA 片段的克隆和鉴定第77页
   ·讨论第77-83页
     ·总 RNA 分离的体会第77-78页
     ·SMART 技术合成CDNA 的优势第78-80页
     ·抑制性消减杂交技术(SSH)及构建 SSH 消减文库的体会第80-82页
     ·T/A 克隆第82-83页
   ·小结第83-84页
4 研究三 绒山羊次级毛囊重建前后 CDNA 消减文库测序及分析第84-104页
   ·实验材料第84页
   ·实验方法第84-85页
     ·CDNA 消减文库测序第84页
     ·CDNA 消减文库的生物信息学分析第84-85页
   ·结果第85-102页
     ·消减文库序列的生物信息学分析第85-101页
     ·新序列的核酸提交信息第101-102页
   ·讨论第102-103页
   ·小结第103-104页
5 研究四 CDNA 表达谱芯片筛选绒山羊绒毛生长相关的基因第104-112页
   ·实验试剂与药品第104页
   ·实验方法第104-108页
     ·RNA 的提取及鉴定第104页
     ·对样品 RNA 进行荧光标记第104-106页
     ·杂交与清洗第106-107页
     ·芯片扫描第107页
     ·芯片图像的采集与数据分析第107-108页
   ·结果第108-110页
     ·TOTAL RNA 质检结果第108页
     ·纯化后 PCR 产物第108-109页
     ·芯片杂交结果第109-110页
   ·讨论第110-112页
     ·应用 CDNA 芯片与SSH 结合筛选绒山羊绒毛生长相关的差异表达基因第110-111页
     ·休止期次级毛囊差异表达基因第111-112页
   ·小结第112页
6 论文总体结论第112-113页
7 本研究的创新之处第113-114页
致谢第114-115页
参考文献第115-130页
作者简介第130页

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