| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-27页 |
| ·转基因植物中外源基因遗传与表达研究进展 | 第14-18页 |
| ·转基因植物中外源基因遗传方式 | 第14-16页 |
| ·影响转基因植物中外源基因表达的因素 | 第16-18页 |
| ·转基因棉花遗传工程中常用的三种遗传转化方法 | 第18-19页 |
| ·农杆菌介导转化法 | 第18页 |
| ·基因枪轰击转化法 | 第18页 |
| ·花粉管通道转化法 | 第18-19页 |
| ·根癌农杆菌介导遗传转化植物分子机制 | 第19-21页 |
| ·转基因植物外源基因拷贝数方法学研究进展 | 第21页 |
| ·Southern Blot 法 | 第21页 |
| ·荧光原位杂交法 | 第21页 |
| ·实时定量 PCR 法 | 第21页 |
| ·转基因植物中 T-DNA 插入子侧翼序列克隆方法 | 第21-23页 |
| ·质粒拯救法 | 第22页 |
| ·反向 PCR 法 | 第22页 |
| ·热不对称交错 PCR 法 | 第22-23页 |
| ·转基因植物中 T-DNA 整合分子特征 | 第23-24页 |
| ·转基因定点整合技术 | 第24-25页 |
| ·基因定点整合技术的理论基础 | 第24页 |
| ·植物中应用的定点重组系统 | 第24-25页 |
| ·课题研究目的及意义和研究内容 | 第25-27页 |
| ·研究目的及意义 | 第25页 |
| ·研究内容 | 第25-27页 |
| 第二章 PfaffI 法分析转基因棉花T-DNA 拷贝数 | 第27-57页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·棉花材料 | 第27-28页 |
| ·菌株和载体 | 第28页 |
| ·化学和分子生物学试剂 | 第28页 |
| ·PCR 引物 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-41页 |
| ·卡那霉素抗性检测 | 第28-29页 |
| ·棉花基因组 DNA 的提取 | 第29-31页 |
| ·质粒 DNA 的提取 | 第31-32页 |
| ·转基因棉花 PCR 分子检测 | 第32-33页 |
| ·实时定量 PCR 分析转基因拷贝数 | 第33-41页 |
| ·Southern Blot 法确定单拷贝转基因棉花株系 | 第33-39页 |
| ·SadⅠ和 NPTⅡ的标准曲线的建立 | 第39-41页 |
| ·PfaffI 法分析转基因拷贝数 | 第41页 |
| ·结果与分析 | 第41-57页 |
| ·实时定量 PCR 分析阳性对照转基因拷贝数 Southern 杂交 | 第41-44页 |
| ·杂交探针标记效率 | 第41-42页 |
| ·限制性内切酶硝化棉花基因组DNA | 第42-43页 |
| ·棉花基因组NPTⅡ基因拷贝数的Southern杂交 | 第43-44页 |
| ·实时定量 PCR 分析转基因拷贝数 | 第44-53页 |
| ·卡那霉素抗性检测 | 第45页 |
| ·棉花基因组DNA的电泳检测 | 第45页 |
| ·转基因棉花PCR分子检测 | 第45-46页 |
| ·实时定量PCR引物扩增特异性 | 第46-47页 |
| ·SadⅠ和NPTⅡ定量PCR 扩增曲线和熔解曲线 | 第47-48页 |
| ·SadⅠ和NPTⅡ定量PCR扩增效率 | 第48-49页 |
| ·转基因拷贝数的估算 | 第49-52页 |
| ·转基因T代单株的Southern杂交验证 | 第52-53页 |
| ·三种转基因方法转化棉花外源基因拷贝数比较 | 第53-57页 |
| 第三章 根癌农杆菌介导转基因棉花中 T-DNA 整合特征 | 第57-82页 |
| ·实验材料 | 第57-59页 |
| ·棉花材料 | 第57-58页 |
| ·菌株和载体 | 第58页 |
| ·化学和分子生物学试剂 | 第58页 |
| ·PCR 引物 | 第58页 |
| ·培养基配制 | 第58-59页 |
| ·实验方法 | 第59-69页 |
| ·棉花基因组 DNA 的提取 | 第59页 |
| ·转基因棉花 PCR 分子检测 | 第59页 |
| ·转基因棉花基因组中 T-DNA 侧翼序列 | 第59-65页 |
| ·Tail-PCR 扩增引物的设计 | 第59-60页 |
| ·Tail-PCR 第一轮反应 | 第60-62页 |
| ·Tail-PCR 第二轮反应 | 第62-64页 |
| ·Tail-PCR 第三轮反应 | 第64-65页 |
| ·Tail-PCR 扩增 T0代转化材料产物的克隆 | 第65-69页 |
| ·扩增产物的胶回收 | 第65-66页 |
| ·胶回收产物与p MD-18T 载体的连接 | 第66页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 DH5α感受态细胞 | 第66页 |
| ·阳性克隆的蓝白斑筛选 | 第66页 |
| ·阳性克隆的菌落 PCR 鉴定 | 第66-68页 |
| ·阳性菌落质粒提取 PCR 鉴定及测序 | 第68-69页 |
| ·T-DNA 边界区域的重组分析 | 第69页 |
| ·T-DNA 边界序列重组分析 | 第69页 |
| ·T-DNA 侧翼序列的生物信息学分析 | 第69页 |
| ·结果与分析 | 第69-82页 |
| ·根癌农杆菌转基因 T0代单株 T-DNA 侧翼序列的克隆 | 第69-74页 |
| ·根癌农杆菌转基因 T0代单株的 PCR 鉴定 | 第69-70页 |
| ·Tail-PCR 反应条件的优化及三轮PCR 产物电泳分析 | 第70-72页 |
| ·Tail-PCR 第三轮PCR 产物胶回收琼脂糖凝胶电泳分析 | 第72页 |
| ·PCR 产物的TA 克隆 | 第72-73页 |
| ·阳性克隆的菌落 PCR 鉴定 | 第73-74页 |
| ·根癌农杆菌转基因 T0代棉花中 T-DNA 边界区域的整合特征 | 第74-77页 |
| ·根癌农杆菌转基因 T0代棉花中 T-DNA 剪辑位点碱基组成特征 | 第77-79页 |
| ·根癌农杆菌转基因 T代棉花中 T-DNA 在棉花基因组的分布 | 第79-81页 |
| ·棉花基因组中 T-DNA 高频整合的一个序列 | 第81-82页 |
| 第四章 讨论和结论 | 第82-86页 |
| ·讨论 | 第82-85页 |
| ·三种转基因方法分别转化植物外源基因拷贝数差异 | 第82页 |
| ·研究转基因植物外源基因拷贝数技术与方法 | 第82-84页 |
| ·转基因植物中 T-DNA 整合分子特征 | 第84-85页 |
| ·结论(创新点) | 第85-86页 |
| ·PfaffI 法在分析转基因棉花中整合T-DNA 拷贝数的应用 | 第85页 |
| ·三种转化方法转化棉花中整合T-DNA 拷贝数的差异 | 第85页 |
| ·转基因棉花中整合 T-DNA 的分子特征及剪辑位点碱基组成 | 第85页 |
| ·T-DNA 在转基因棉花基因组的整合热点序列特征 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-99页 |
| 致谢 | 第99-100页 |
| 附录 | 第100-101页 |
| 个人简历 | 第101页 |
