| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-15页 |
| 1 引言 | 第15-23页 |
| ·研究目的和意义 | 第15-16页 |
| ·文献综述 | 第16-21页 |
| ·植物胁迫反应的分子机制 | 第16-18页 |
| ·植物水通道蛋白与非生物胁迫的关系 | 第18-21页 |
| ·本研究的总体技术路线及研究内容 | 第21-23页 |
| ·本研究课题的来源 | 第21页 |
| ·总体技术路线 | 第21页 |
| ·研究内容 | 第21-22页 |
| ·本研究的创新点 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-37页 |
| ·目的EST 的筛选 | 第23-26页 |
| ·试验材料 | 第23页 |
| ·试验方法 | 第23-26页 |
| ·目的EST 的序列分析 | 第26页 |
| ·试验材料 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26页 |
| ·非全长基因的电子克隆 | 第26-27页 |
| ·试验材料 | 第26页 |
| ·试验方法 | 第26-27页 |
| ·通过5’-RACE 技术扩增目的基因未知片段 | 第27-28页 |
| ·试验材料 | 第27页 |
| ·试验方法 | 第27-28页 |
| ·PCR 产物的T-A 克隆 | 第28-30页 |
| ·试验材料 | 第28页 |
| ·试验方法 | 第28-30页 |
| ·基因全长序列的获得 | 第30-31页 |
| ·试验材料 | 第30-31页 |
| ·试验方法 | 第31页 |
| ·基因产物的生物信息学分析 | 第31页 |
| ·试验材料 | 第31页 |
| ·试验方法 | 第31页 |
| ·基因产物的细胞内定位分析 | 第31-32页 |
| ·试验材料 | 第31-32页 |
| ·试验方法 | 第32页 |
| ·野生大豆中目的基因的表达特性分析 | 第32-33页 |
| ·试验材料 | 第32页 |
| ·试验方法 | 第32-33页 |
| ·超量表达目的基因的拟南芥株系的获得 | 第33-34页 |
| ·试验材料 | 第33页 |
| ·试验方法 | 第33-34页 |
| ·转基因拟南芥的非生物胁迫耐性分析 | 第34-37页 |
| ·试验材料 | 第34页 |
| ·试验方法 | 第34-37页 |
| 3 结果与分析 | 第37-85页 |
| ·目的EST 的筛选 | 第37-41页 |
| ·芯片杂交获得野生大豆ESTs 胁迫早期表达情况 | 第37页 |
| ·芯片杂交结果的Real-time PCR 验证 | 第37-40页 |
| ·野生大豆非生物胁迫早期应答膜蛋白类EST 的确定 | 第40-41页 |
| ·目的EST 序列的分析 | 第41-43页 |
| ·PTE-1929 的序列分析 | 第41-42页 |
| ·PTE-1023 序列的分析 | 第42-43页 |
| ·GsTIP 全长序列的获得 | 第43-45页 |
| ·GsTIP 的全长验证PCR | 第43-44页 |
| ·GsTIP 全长验证结果分析 | 第44-45页 |
| ·GsPIP 的电子克隆 | 第45-47页 |
| ·PTE-1023 的电子延伸 | 第45-46页 |
| ·电子延伸验证引物设计 | 第46页 |
| ·电子延伸结果的PCR 验证 | 第46-47页 |
| ·电子延伸验证结果分析 | 第47页 |
| ·GsPIP 全长序列的获得 | 第47-51页 |
| ·通过5’-RACE 获得未知部分序列 | 第47-49页 |
| ·GsPIP 全长序列的获得 | 第49-51页 |
| ·GsTIP 蛋白产物的生物信息学分析 | 第51-56页 |
| ·GsTIP 与已知水通道蛋白的比较 | 第52-53页 |
| ·GsTIP 的物理性质预测 | 第53页 |
| ·GsTIP 的保守结构域预测 | 第53-54页 |
| ·GsTIP 的二级结构预测 | 第54-56页 |
| ·GsPIP 蛋白产物的生物信息学分析 | 第56-62页 |
| ·GsPIP 与已知水通道蛋白的比较 | 第57-58页 |
| ·GsPIP2 的物理性质预测 | 第58页 |
| ·GsPIP2 的保守结构域预测 | 第58-59页 |
| ·GsPIP2 的二级结构预测 | 第59-62页 |
| ·GsTIP 与GsPIP2 蛋白的细胞内定位分析 | 第62-67页 |
| ·GsTIP 瞬时表达载体的构建 | 第62页 |
| ·GsTIP 的瞬时表达与细胞内定位分析 | 第62-64页 |
| ·GsPIP2 瞬时表达载体的构建 | 第64-65页 |
| ·GsPIP2 的瞬时表达与细胞内定位分析 | 第65-67页 |
| ·野生大豆中GsTIP 与GsPIP2 的表达特性分析 | 第67-68页 |
| ·野生大豆中GsTIP 的表达特性分析 | 第67页 |
| ·野生大豆中GsPIP2 的表达特性分析 | 第67-68页 |
| ·GsTIP 的非生物胁迫耐性分析 | 第68-77页 |
| ·GsTIP 的超量表达载体构建 | 第68-69页 |
| ·超量表达GsTIP 的拟南芥的获得 | 第69-70页 |
| ·GsTIP 的非生物胁迫耐性分析 | 第70-77页 |
| ·GsPIP2 的非生物胁迫耐性分析 | 第77-85页 |
| ·GsPIP2 的超量表达载体构建 | 第77页 |
| ·超量表达GsPIP2 的拟南芥的获得 | 第77-78页 |
| ·GsPIP2 的非生物胁迫耐性分析 | 第78-85页 |
| 4 讨论 | 第85-90页 |
| ·目的基因的选择 | 第85页 |
| ·对5’-RACE 技术的改进 | 第85-86页 |
| ·GsTIP 基因与非生物胁迫的关系 | 第86-87页 |
| ·GsTIP 基因对非生物胁迫的响应 | 第86页 |
| ·GsTIP 对非生物胁迫耐性的影响 | 第86-87页 |
| ·GsPIP2 基因与非生物胁迫的关系 | 第87-88页 |
| ·GsPIP2 基因对非生物胁迫的响应 | 第87页 |
| ·GsPIP2 对非生物胁迫耐性的影响 | 第87-88页 |
| ·GsTIP、GsPIP2 基因的应用前景 | 第88-90页 |
| ·基因在非生物胁迫反应分子机理研究中的应用前景 | 第88页 |
| ·基因在耐逆分子育种研究中的应用前景 | 第88-90页 |
| 5 结论 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-102页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第102页 |
