| 摘要 | 第3-9页 |
| Abstract | 第9-15页 |
| 第一章 引言 | 第24-36页 |
| 1.1 PGRN分子的概述 | 第24-30页 |
| 1.1.1 PGRN蛋白质结构、基因定位以及分布 | 第24-25页 |
| 1.1.2 PGRN的生物学功能 | 第25-30页 |
| 1.2 FAM76B分子的概述 | 第30-31页 |
| 1.2.1 FAM76B蛋白质结构、基因定位 | 第30页 |
| 1.2.2 FAM76B蛋白可能的生物学功能 | 第30-31页 |
| 1.3 非酒精性脂肪性肝的概述 | 第31-35页 |
| 1.3.1 非酒精性脂肪性肝 | 第31-32页 |
| 1.3.2 肝脂肪变性的分子机制 | 第32-35页 |
| 1.4 课题研究意义 | 第35-36页 |
| 第二章 FAM76B蛋白原核表达纯化及FAM76B单克隆抗体的制备 | 第36-64页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第36-40页 |
| 2.1.1 质粒载体、菌种及细胞 | 第36-37页 |
| 2.1.2 主要材料和试剂 | 第37页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第37-38页 |
| 2.1.4 主要溶液配制 | 第38-40页 |
| 2.2 实验方法 | 第40-50页 |
| 2.2.1 hFAM76B基因的克隆 | 第40-42页 |
| 2.2.2 大肠杆菌DH5α化学转化感受态细胞的制备 | 第42-43页 |
| 2.2.3 转化 | 第43页 |
| 2.2.4 pGEMT/hFAM76B单克隆质粒的提取及鉴定 | 第43-44页 |
| 2.2.5 携带人FAM76B-Flag及FAM76B-TAA重组腺病毒表达穿梭载体的构建 | 第44-45页 |
| 2.2.6 携带人FAM76B-6His原核表达载体的构建 | 第45页 |
| 2.2.7 人FAM76B-6His蛋白的原核表达、非变性纯化 | 第45-46页 |
| 2.2.8 人FAM76B单克隆抗体的制备 | 第46-47页 |
| 2.2.9 人FAM76B截短体的构建和表达 | 第47页 |
| 2.2.10 人FAM76B单克隆抗体的检测 | 第47-50页 |
| 2.3 实验结果 | 第50-60页 |
| 2.3.1 人FAM76B基因的克隆 | 第50-51页 |
| 2.3.2 携带人FAM76B-Flag及FAM76B-TAA重组腺病毒表达穿梭载体的构建 | 第51页 |
| 2.3.3 携带人FAM76B-6His原核表达载体的构建 | 第51-52页 |
| 2.3.4 人FAM76B截短体的构建和表达 | 第52-53页 |
| 2.3.5 人FAM76B原核纯化后SDS-PAGE及Western blot检测 | 第53-54页 |
| 2.3.6 人FAM76B单克隆抗体的鉴定 | 第54-60页 |
| 2.4 讨论 | 第60-64页 |
| 第三章 FAM76B蛋白在小鼠组织中的分布 | 第64-82页 |
| 3.1 实验材料和仪器 | 第64-66页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第64页 |
| 3.1.2 主要材料和试剂 | 第64-65页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第65页 |
| 3.1.4 主要溶液配制 | 第65-66页 |
| 3.2 实验方法 | 第66-73页 |
| 3.2.1 mFAM76B基因的克隆 | 第66-67页 |
| 3.2.2 携带鼠FAM76B-Flag及FAM76B-TAA重组腺病毒E1穿梭载体的构建 | 第67页 |
| 3.2.3 人FAM76B单克隆抗体在鼠源FAM76B蛋白的应用 | 第67-69页 |
| 3.2.4 组织标本的获取及处理 | 第69页 |
| 3.2.5 主要组织总RNA的提取及反转录 | 第69-70页 |
| 3.2.6 组织核蛋白的提取 | 第70页 |
| 3.2.7 主要组织中FAM76B基因的Real-time PCR | 第70-71页 |
| 3.2.8 主要组织中FAM76B蛋白的Western blot检测 | 第71-72页 |
| 3.2.9 主要组织中FAM76B蛋白的免疫组织化学染色 | 第72-73页 |
| 3.2.10 统计学分析 | 第73页 |
| 3.3 实验结果 | 第73-80页 |
| 3.3.1 mFAM76B基因的克隆 | 第73-74页 |
| 3.3.2 携带鼠FAM76B-Flag及FAM76B-TAA重组腺病毒表达穿梭载体的构建 | 第74页 |
| 3.3.3 人FAM76B单克隆抗体与鼠源FAM76B蛋白的反应 | 第74-78页 |
| 3.3.4 FAM76B的mRNA在小鼠主要组织中的表达 | 第78-79页 |
| 3.3.5 FAM76B蛋白在小鼠主要组织中的分布 | 第79-80页 |
| 3.4 讨论 | 第80-82页 |
| 第四章 FAM76B基因敲除小鼠鉴定及初步表型分析 | 第82-114页 |
| 4.1 实验材料和仪器 | 第83-84页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第83页 |
| 4.1.2 主要材料和试剂 | 第83页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第83-84页 |
| 4.1.4 主要溶液配制 | 第84页 |
| 4.2 实验方法 | 第84-90页 |
| 4.2.1 小鼠的饲养和繁殖 | 第84-85页 |
| 4.2.2 小鼠的基因型鉴定 | 第85-88页 |
| 4.2.3 组织标本的获取及处理 | 第88页 |
| 4.2.4 不伺时期肝脏组织的油红染色 | 第88-89页 |
| 4.2.5 不同时期肝脏组织和腹腔脂肪组织苏木精-伊红(HE)染色 | 第89-90页 |
| 4.2.6 统计学分析 | 第90页 |
| 4.3 实验结果 | 第90-111页 |
| 4.3.1 FAM76B基因敲除小鼠的鉴定 | 第90-91页 |
| 4.3.2 FAM76B基因敲除鉴定 | 第91-92页 |
| 4.3.3 小鼠的繁殖 | 第92-93页 |
| 4.3.4 小鼠的生长 | 第93-95页 |
| 4.3.5 不同时期FAM76B+/-及WT小鼠肝脏组织及腹腔脂肪组织病理学分析 | 第95-111页 |
| 4.4 讨论 | 第111-114页 |
| 4.4.1 FAM76B基因敲除小鼠模型的建立 | 第111页 |
| 4.4.2 FAM76B基因敲除小鼠的鉴定和繁育 | 第111页 |
| 4.4.3 FAM76B和生长发育 | 第111-112页 |
| 4.4.4 FAM76B和NAFLD | 第112-113页 |
| 4.4.5 FAM76B和腹腔脂肪组织 | 第113-114页 |
| 第五章 FAM76B基因敲除对小鼠肝脏脂代谢异常的作用机制初探 | 第114-134页 |
| 5.1 实验材料和仪器 | 第115-116页 |
| 5.1.1 实验动物 | 第115页 |
| 5.1.2 主要材料和试剂 | 第115-116页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第116页 |
| 5.1.4 主要溶液配制 | 第116页 |
| 5.2 实验方法 | 第116-119页 |
| 5.2.1 样品的采集 | 第116页 |
| 5.2.2 检测指标及方法 | 第116-118页 |
| 5.2.3 数据分析与处理 | 第118-119页 |
| 5.3 实验结果 | 第119-130页 |
| 5.3.1 不同时期FAM76B+/-小鼠和WT小鼠血清指标的变化 | 第119-121页 |
| 5.3.2 不同时期FAM76B+/-小鼠和WT小鼠肝脏脂代谢相关基因的表达 | 第121-125页 |
| 5.3.3 不同时期FAM76B+/-小鼠和野生型小鼠肝脏中lipin1、SREBP-1、PPARα和PGC-1α的mRNA相对表达量 | 第125-128页 |
| 5.3.4 不同时期FAM76B+/-小鼠和野生型小鼠肝脏中F4/80、TNFα以及PGRN的表达 | 第128-130页 |
| 5.4 讨论 | 第130-134页 |
| 5.4.1 FAM76B+/-小鼠血脂及肝功能特征 | 第130页 |
| 5.4.2 FAM76B+/-小鼠脂代谢相关基因的表达 | 第130页 |
| 5.4.3 FAM76B+/-小鼠脂代谢相关基因的转录因子的表达 | 第130-131页 |
| 5.4.4 FAM76B+/-小鼠的炎症反应 | 第131-134页 |
| 第六章 总结 | 第134-140页 |
| 参考文献 | 第140-150页 |
| 致谢 | 第150-152页 |
| 攻读博士学位期间科研成果 | 第152-153页 |
