| 摘要 | 第2-3页 |
| Abstract | 第3-4页 |
| 引言 | 第8-9页 |
| 1 文献综述 | 第9-25页 |
| 1.1 慢性肾衰竭与β_2微球蛋白 | 第9-13页 |
| 1.1.1 慢性肾衰竭概述 | 第9-10页 |
| 1.1.2 β_2微球蛋白简介 | 第10-11页 |
| 1.1.3 β_2微球蛋白致病机理 | 第11页 |
| 1.1.4 治疗透析相关淀粉样变的方法 | 第11-13页 |
| 1.2 纳米抗体 | 第13-19页 |
| 1.2.1 纳米抗体的结构特征 | 第13-15页 |
| 1.2.2 纳米抗体的理化特性 | 第15-16页 |
| 1.2.3 纳米抗体的应用 | 第16-19页 |
| 1.3 蛋白质固载 | 第19-24页 |
| 1.3.1 随机固载法 | 第19-20页 |
| 1.3.2 定向固载法 | 第20页 |
| 1.3.3 转肽酶A及其在蛋白固载中的应用 | 第20-23页 |
| 1.3.4 点击化学技术及其应用 | 第23-24页 |
| 1.4 本论文研究内容、目的和意义 | 第24-25页 |
| 2 融合有转肽酶A识别标签的抗β_2M纳米抗体的制备及活性检测 | 第25-45页 |
| 2.1 引言 | 第25页 |
| 2.2 实验材料与仪器 | 第25-28页 |
| 2.2.1 材料与试剂 | 第25-27页 |
| 2.2.2 主要仪器与耗材 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-38页 |
| 2.3.1 抗β_2M纳米抗体基因序列的设计 | 第28页 |
| 2.3.2 感受态细胞的制备与重组质粒的转化 | 第28-30页 |
| 2.3.3 重组纳米抗体的诱导表达 | 第30页 |
| 2.3.4 菌体的破碎 | 第30-31页 |
| 2.3.5 SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第31-32页 |
| 2.3.6 固定化金属离子亲和层析 | 第32-33页 |
| 2.3.7 纳米抗体的超滤换液、浓缩、保存 | 第33页 |
| 2.3.8 蛋白浓度和纯度的测定 | 第33-35页 |
| 2.3.9 ELISA法检测纳米抗体活性 | 第35-36页 |
| 2.3.10 Biacore法测定纳米抗体亲和力 | 第36-38页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第38-43页 |
| 2.4.1 重组抗β_2M纳米抗体的可溶表达检测 | 第38-40页 |
| 2.4.2 金属离子亲和层析 | 第40-41页 |
| 2.4.3 ELISA法检测纳米抗体的抗原结合活性 | 第41-42页 |
| 2.4.4 Biacore测定纳米抗体的亲和力 | 第42-43页 |
| 2.5 小结 | 第43-45页 |
| 3 转肽酶A的表达优化与活性评价 | 第45-60页 |
| 3.1 引言 | 第45页 |
| 3.2 实验材料与仪器 | 第45-46页 |
| 3.2.1 主要仪器与耗材 | 第45-46页 |
| 3.2.2 材料与试剂 | 第46页 |
| 3.3 实验方法 | 第46-50页 |
| 3.3.1 转肽酶A的重组表达 | 第46-47页 |
| 3.3.2 金属离子亲和层析 | 第47页 |
| 3.3.3 转肽酶A表达条件的优化 | 第47-48页 |
| 3.3.4 转肽酶A的活性测定 | 第48-49页 |
| 3.3.5 转肽反应条件的优化 | 第49-50页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第50-59页 |
| 3.4.1 转肽酶A的可溶表达检测 | 第50页 |
| 3.4.2 转肽酶A表达条件的优化 | 第50-52页 |
| 3.4.3 金属离子亲和层析 | 第52-55页 |
| 3.4.4 转肽反应活性检测 | 第55-56页 |
| 3.4.5 底物和酶的比例对酶促反应效率的影响 | 第56-57页 |
| 3.4.6 反应时间和温度对酶促反应效率的影响 | 第57-59页 |
| 3.5 小结 | 第59-60页 |
| 4 血液净化吸附剂的制备及性能评价 | 第60-73页 |
| 4.1 引言 | 第60页 |
| 4.2 实验材料与仪器 | 第60-61页 |
| 4.2.1 材料与试剂 | 第60-61页 |
| 4.2.2 主要仪器与耗材 | 第61页 |
| 4.3 实验方法 | 第61-65页 |
| 4.3.1 血液净化吸附剂的制备 | 第61-64页 |
| 4.3.2 环氧基、氨基密度的测定 | 第64页 |
| 4.3.3 血液净化吸附剂对β_2M的特异性吸附评价 | 第64页 |
| 4.3.4 血液净化吸附剂对β_2M的吸附动力学考察 | 第64-65页 |
| 4.3.5 血液净化吸附剂对β_2M的血浆吸附考察 | 第65页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第65-72页 |
| 4.4.1 纳米抗体吸附剂的合成 | 第65-68页 |
| 4.4.2 血液净化吸附剂对β_2M的特异性吸附评价 | 第68-69页 |
| 4.4.3 血液净化吸附剂对β_2M的吸附动力学考察 | 第69-70页 |
| 4.4.4 血液净化吸附剂对β_2M的血浆吸附考察 | 第70-72页 |
| 4.5 小结 | 第72-73页 |
| 结论 | 第73-74页 |
| 展望 | 第74-75页 |
| 参考文献 | 第75-81页 |
| 附录A 转肽酶A的序列信息 | 第81-82页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第82-83页 |
| 致谢 | 第83-85页 |
