| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 前言 | 第11-35页 |
| 1.1 低温治疗 | 第11-14页 |
| 1.1.1 低温对机体保护作用的机制 | 第11-13页 |
| 1.1.2 低温治疗的应用 | 第13-14页 |
| 1.2 温度感知的分子机制 | 第14-19页 |
| 1.2.1 温度感受器 | 第14-16页 |
| 1.2.2 温度信息的传导 | 第16-18页 |
| 1.2.3 温度信息在下丘脑视前区的整合 | 第18-19页 |
| 1.3冷和薄荷醇敏感的受体——TRPM8 | 第19-27页 |
| 1.3.1 TRPM8通道的特点 | 第20-21页 |
| 1.3.2 TRPM8的表达分布 | 第21-22页 |
| 1.3.3 TRPM8的调控 | 第22-23页 |
| 1.3.4 TRPM8的生物学功能 | 第23-27页 |
| 1.4冷敏感的疼痛受体——TRPA1 | 第27-28页 |
| 1.4.1 TRPA1与危险信号感知 | 第27-28页 |
| 1.4.2 TRPA1与温度感知 | 第28页 |
| 1.5 炎症 | 第28-33页 |
| 1.5.1 JAK-STAT激酶通路 | 第29页 |
| 1.5.2 MAPK通路 | 第29-31页 |
| 1.5.3 NFκB通路 | 第31-32页 |
| 1.5.4 炎症因子 | 第32-33页 |
| 1.6 研究方法 | 第33-34页 |
| 1.6.1 实验设计 | 第33页 |
| 1.6.2 实验方案 | 第33-34页 |
| 1.7 论文组织结构 | 第34-35页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第35-54页 |
| 2.1 动物实验 | 第35-36页 |
| 2.1.1 仪器与设备 | 第35页 |
| 2.1.2 小鼠低温模型建立 | 第35页 |
| 2.1.3 低温模型小鼠下丘脑样品采集 | 第35页 |
| 2.1.4 尾静脉注射薄荷醇 | 第35-36页 |
| 2.1.5 小鼠双侧劲总动脉结扎模型 | 第36页 |
| 2.2 细胞实验 | 第36-45页 |
| 2.2.1 实验设备 | 第36页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第36-37页 |
| 2.2.3 细胞系 | 第37页 |
| 2.2.4 细胞低温模型建立 | 第37-38页 |
| 2.2.5 薄荷醇对PC12的作用 | 第38页 |
| 2.2.6 细胞培养 | 第38-39页 |
| 2.2.7 细胞凋亡测试 | 第39页 |
| 2.2.8 CCK细胞计数 | 第39-40页 |
| 2.2.9 钙成像 | 第40页 |
| 2.2.10 免疫荧光单标记 | 第40页 |
| 2.2.11 免疫荧光双标记 | 第40-41页 |
| 2.2.12 siRNA实验 | 第41页 |
| 2.2.13 细胞质和细胞核蛋白分离 | 第41-42页 |
| 2.2.14 细胞膜蛋白-胞浆蛋白分离 | 第42页 |
| 2.2.15 构建TRPM8敲低(knock-down)的稳转细胞系 | 第42-45页 |
| 2.3 通用实验方法 | 第45-52页 |
| 2.3.1 仪器与设备 | 第45-46页 |
| 2.3.2 总RNA提取 | 第46-47页 |
| 2.3.3 反转录PCR | 第47-48页 |
| 2.3.4 荧光实时定量PCR | 第48-49页 |
| 2.3.5 Western Blot蛋白检测 | 第49-51页 |
| 2.3.6 免疫共沉淀 | 第51-52页 |
| 2.4 引物设计 | 第52-54页 |
| 第3章 ICR小鼠下丘脑中低温敏感的TRPs | 第54-62页 |
| 3.1 引论 | 第54页 |
| 3.2 实验设计 | 第54-55页 |
| 3.3 实验结果 | 第55-61页 |
| 3.3.1 体温变化曲线 | 第55-56页 |
| 3.3.2 低温刺激时小鼠下丘脑内相关基因的表达筛选 | 第56-58页 |
| 3.3.3 低温对下丘脑冷受体和炎症因子的调控 | 第58-60页 |
| 3.3.4 薄荷醇对小鼠下丘脑中TRPs表达的调控作用 | 第60-61页 |
| 3.4 本章小结 | 第61-62页 |
| 第4章 PC12细胞中TRPM8对低温刺激的响应 | 第62-77页 |
| 4.1 引论 | 第62-63页 |
| 4.2 实验设计 | 第63页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第63-76页 |
| 4.3.1 低温对PC12细胞凋亡的影响 | 第63-64页 |
| 4.3.2 低温对PC12细胞增殖的影响 | 第64-65页 |
| 4.3.3 低温对PC12细胞胞内Ca~(2+)浓度的作用 | 第65-66页 |
| 4.3.4 低温刺激时PC12细胞相关基因的表达筛选 | 第66-68页 |
| 4.3.5 不同温度低温对PC12细胞中相关基因表达的调控 | 第68-69页 |
| 4.3.6 低温对PC12细胞中相关基因蛋白表达的调控 | 第69-70页 |
| 4.3.7 TRPM8siRNA | 第70-71页 |
| 4.3.8 TRPA1siRNA | 第71-72页 |
| 4.3.9 薄荷醇对PC12的作用 | 第72-74页 |
| 4.3.10 TRPM8/TNFα免疫荧光双标记 | 第74-76页 |
| 4.4 本章小结 | 第76-77页 |
| 第5章 TRPM8对TNFα的负调控作用 | 第77-91页 |
| 5.1 引论 | 第77页 |
| 5.2 实验设计 | 第77-78页 |
| 5.3 实验结果 | 第78-90页 |
| 5.3.1 TRPM8敲低细胞的构建 | 第78-79页 |
| 5.3.2 TRPM8敲低的细胞对低温的响应 | 第79-81页 |
| 5.3.3 低温对TRPM8KDPC12细胞中冷受体和炎症因子的调控 | 第81-83页 |
| 5.3.4 低温对WT细胞和KD细胞中相关蛋白表达的比较 | 第83-85页 |
| 5.3.5 薄荷醇对KD细胞中TRPM8和TNFα作用 | 第85-86页 |
| 5.3.6 胞浆蛋白和核蛋白分离 | 第86-87页 |
| 5.3.7 NFκB阻断剂JSH-23 | 第87-90页 |
| 5.4 本章小结 | 第90-91页 |
| 第6章 TRPM8通过NFκB对TNFα负调控作用的机制 | 第91-100页 |
| 6.1 引论 | 第91页 |
| 6.2 实验设计 | 第91-92页 |
| 6.3 实验结果 | 第92-99页 |
| 6.3.1 TRPM8的分布 | 第92-93页 |
| 6.3.2 TRPM8与NFκB的共定位 | 第93-94页 |
| 6.3.3 TRPM8与NFκB的免疫共沉淀 | 第94-99页 |
| 6.4 本章小结 | 第99-100页 |
| 第7章 小鼠脑缺血复灌模型 | 第100-103页 |
| 7.1 引论 | 第100页 |
| 7.2 实验设计 | 第100页 |
| 7.3 实验结果与讨论 | 第100-103页 |
| 第8章 讨论与展望 | 第103-109页 |
| 8.1 讨论 | 第103-107页 |
| 8.1.1 低温诱导的TRPM8表达的激活 | 第103页 |
| 8.1.2 低温的生物学意义 | 第103-104页 |
| 8.1.3 TRPM8激活与TNFα的抑制 | 第104-105页 |
| 8.1.4 TRPM8的分布 | 第105页 |
| 8.1.5 TRPM8通过核转录因子NFκB抑制TNFα的表达 | 第105-106页 |
| 8.1.6 TRPM8与核转录因子NFκB的相互作用 | 第106页 |
| 8.1.7 TRPA1在冷应激反应中的作用 | 第106-107页 |
| 8.1.8 TRPM8激活对TNFα负调控作用的意义与应用 | 第107页 |
| 8.2 展望 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-121页 |
| 致谢 | 第121-123页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第123页 |
