| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 附录 | 第8-14页 |
| 第1章 绪论 | 第14-27页 |
| 1.1 急性肝衰竭与生物人工肝治疗 | 第14-15页 |
| 1.2 BAL反应器 | 第15-18页 |
| 1.2.1 中空纤维型 | 第15页 |
| 1.2.2 平板型 | 第15-16页 |
| 1.2.3 微囊/流化床型 | 第16-17页 |
| 1.2.4 填充床型 | 第17-18页 |
| 1.3 肝细胞及来源 | 第18-20页 |
| 1.3.1 原代动物肝细胞 | 第18页 |
| 1.3.2 人肝癌细胞系 | 第18-19页 |
| 1.3.3 干细胞分化而来的肝细胞 | 第19-20页 |
| 1.3.4 成体细胞转分化而来的肝细胞 | 第20页 |
| 1.4 肝细胞三维培养支架 | 第20-23页 |
| 1.4.1 基于胞外基质的三维支架 | 第20-21页 |
| 1.4.2 基于天然聚合物的三维支架 | 第21页 |
| 1.4.3 基于合成聚合物的三维支架 | 第21-23页 |
| 1.5 肝细胞培养支架表面修饰 | 第23-24页 |
| 1.5.1 功能分子修饰 | 第23-24页 |
| 1.5.2 支架改性方法 | 第24页 |
| 1.6 肝细胞体外培养方式 | 第24-25页 |
| 1.7 本研究的内容、目的与意义 | 第25-27页 |
| 第2章 hiHep细胞体外灌注培养体系构建 | 第27-39页 |
| 2.1 概述 | 第27-28页 |
| 2.2 材料与方法 | 第28-31页 |
| 2.2.1 细胞来源 | 第28页 |
| 2.2.2 HMM培养基配制 | 第28页 |
| 2.2.3 平皿或孔板胶原包被 | 第28页 |
| 2.2.4 细胞复苏与传代 | 第28-29页 |
| 2.2.5 孔板培养 | 第29页 |
| 2.2.6 灌注体系构建 | 第29页 |
| 2.2.7 灌注培养 | 第29页 |
| 2.2.8 细胞计数 | 第29页 |
| 2.2.9 接种率测定 | 第29页 |
| 2.2.10 白蛋白染色 | 第29页 |
| 2.2.11 糖原染色 | 第29-30页 |
| 2.2.12 低密度脂蛋白染色 | 第30页 |
| 2.2.13 胆盐外排观察 | 第30页 |
| 2.2.14 扫描电镜观察 | 第30页 |
| 2.2.15 葡萄糖与谷氨酰胺测定 | 第30页 |
| 2.2.16 白蛋白分泌测定 | 第30页 |
| 2.2.17 基因表达分析 | 第30-31页 |
| 2.2.18 统计分析 | 第31页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第31-38页 |
| 2.3.1 hiHep细胞生长及相关功能表征 | 第31-32页 |
| 2.3.2 用于hiHep细胞培养的灌注体系 | 第32-33页 |
| 2.3.3 灌注速率对hiHep细胞接种和生长的影响 | 第33-35页 |
| 2.3.4 灌注速率对hiHep细胞物质代谢的影响 | 第35页 |
| 2.3.5 灌注速率对hiHep细胞白蛋白分泌和基因表达的影响 | 第35-38页 |
| 2.4 本章小结 | 第38-39页 |
| 第3章 适于hiHep细胞体外培养的PET纤维支架改性 | 第39-60页 |
| 3.1 概述 | 第39-40页 |
| 3.2 材料与方法 | 第40-45页 |
| 3.2.1 材料 | 第40页 |
| 3.2.2 N-乙酰乳糖胺合成 | 第40页 |
| 3.2.3 N-乙酰乳糖胺和明胶接枝 | 第40-41页 |
| 3.2.4 红外光谱分析 | 第41页 |
| 3.2.5 1H核磁共振分析 | 第41页 |
| 3.2.6 XPS分析 | 第41页 |
| 3.2.7 丙烯酸和N-乙酰乳糖胺接枝含量测定 | 第41-42页 |
| 3.2.8 明胶接枝含量测定 | 第42页 |
| 3.2.9 接触角测定 | 第42页 |
| 3.2.10 吸水性能测定 | 第42页 |
| 3.2.11 孔隙率测定 | 第42页 |
| 3.2.12 杨氏模量测定 | 第42-43页 |
| 3.2.13 粗糙度分析 | 第43页 |
| 3.2.14 细胞接种 | 第43页 |
| 3.2.15 贴附率测定 | 第43页 |
| 3.2.16 细胞计数 | 第43页 |
| 3.2.17 扫描电镜观察 | 第43页 |
| 3.2.18 细胞活力观察 | 第43页 |
| 3.2.19 白蛋白与尿素测定 | 第43页 |
| 3.2.20 Ⅰ相与Ⅱ相酶活力测试 | 第43-44页 |
| 3.2.21 胆盐外排指标测定 | 第44页 |
| 3.2.22 解毒能力评价 | 第44页 |
| 3.2.23 数据处理 | 第44-45页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第45-58页 |
| 3.3.1 N-乙酰乳糖胺结构表征 | 第45-46页 |
| 3.3.2 改性PET纤维支架表征 | 第46-48页 |
| 3.3.3 改性PET纤维支架理化分析 | 第48-51页 |
| 3.3.4 改性PET纤维支架对hiHep细胞粘附和增殖的影响 | 第51-52页 |
| 3.3.5 改性PET纤维支架对hiHep细胞活力和形态的影响 | 第52-54页 |
| 3.3.6 改性PET纤维支架对hiHep细胞肝特异性功能的影响 | 第54-57页 |
| 3.3.7 改性PET纤维支架对hiHep细胞解毒功能的影响 | 第57-58页 |
| 3.4 本章小结 | 第58-60页 |
| 第4章 基于PET-Gal的填充床反应器装置构建 | 第60-70页 |
| 4.1 概述 | 第60页 |
| 4.2 材料与方法 | 第60-62页 |
| 4.2.1 细胞扩增 | 第60页 |
| 4.2.2 改性纤维支架制备 | 第60页 |
| 4.2.3 填充床反应器构建 | 第60-61页 |
| 4.2.4 灌注培养 | 第61页 |
| 4.2.5 接种率测定 | 第61页 |
| 4.2.6 细胞密度测定 | 第61页 |
| 4.2.7 细胞形貌观察 | 第61页 |
| 4.2.8 细胞活力观察 | 第61-62页 |
| 4.2.9 葡萄糖与乳酸测定 | 第62页 |
| 4.2.10 白蛋白与尿素测定 | 第62页 |
| 4.2.11 药物代谢测定 | 第62页 |
| 4.2.12 氨消除测定 | 第62页 |
| 4.2.13 统计分析 | 第62页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第62-68页 |
| 4.3.1 PET-Gal纤维支架反应器对hiHep细胞粘附的影响 | 第62-63页 |
| 4.3.2 PET-Gal纤维支架反应器对hiHep细胞生长的影响 | 第63-65页 |
| 4.3.3 PET-Gal纤维支架反应器对hiHep细胞葡萄糖消耗的影响 | 第65-66页 |
| 4.3.4 PET-Gal纤维支架反应器对hiHep细胞功能的影响 | 第66-68页 |
| 4.4 本章小结 | 第68-70页 |
| 第5章 全文总结与展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
| 硕士期间发表的学术论文研究成果 | 第84页 |
