| 摘要 | 第12-14页 |
| Abstract | 第14-15页 |
| 缩略词 | 第16-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-31页 |
| 1.1 结直肠癌的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.1.1 结直肠癌的发病现状和风险因素 | 第18-19页 |
| 1.1.2 结直肠癌的治疗研究进展 | 第19页 |
| 1.2 溶瘤病毒 | 第19-23页 |
| 1.2.1 溶瘤病毒研究历史 | 第19-20页 |
| 1.2.2 溶瘤病毒的种类 | 第20-23页 |
| 1.3 新城疫病毒 | 第23-27页 |
| 1.3.1 新城疫病毒的分子生物学特征 | 第23-24页 |
| 1.3.2 新城疫病毒毒株的分类 | 第24-25页 |
| 1.3.3 新城疫溶瘤治疗研究进展 | 第25-27页 |
| 1.3.4 NDV溶瘤作用机制研究进展 | 第27页 |
| 1.4 新城疫反向遗传系统 | 第27-30页 |
| 1.4.1 构建转录载体需要的分子元件 | 第28-29页 |
| 1.4.2 系统一:重组痘病毒表达T7聚合酶 | 第29页 |
| 1.4.3 系统二:构建稳定表达T7聚合酶的细胞株 | 第29页 |
| 1.4.4 系统三:共转染表达T7聚会酶的质粒 | 第29页 |
| 1.4.5 系统四:基于真核RNA聚合酶Ⅱ转录系统 | 第29-30页 |
| 1.5 本研究的研究意义和主要研究内容 | 第30-31页 |
| 第二章 材料与方法 | 第31-54页 |
| 2.1 主要仪器 | 第31-32页 |
| 2.2 主要耗材 | 第32页 |
| 2.3 主要试剂及实验动物 | 第32-34页 |
| 2.3.1 E.coli菌株 | 第32页 |
| 2.3.2 质粒 | 第32页 |
| 2.3.3 细胞株 | 第32页 |
| 2.3.4 病毒株 | 第32-33页 |
| 2.3.5 实验动物 | 第33页 |
| 2.3.6 分子克隆相关试剂 | 第33页 |
| 2.3.7 细胞生物学用常规试剂 | 第33-34页 |
| 2.4 常用溶液和多种培养基的配制 | 第34-36页 |
| 2.4.1 分子克隆常规溶液 | 第34页 |
| 2.4.2 常规蛋白质分析实验缓冲液的配制 | 第34-35页 |
| 2.4.3 HE染色及免疫组织化学染色分析相关溶液 | 第35-36页 |
| 2.4.4 细胞培养相关溶液的配制 | 第36页 |
| 2.5 实验方法 | 第36-53页 |
| 2.5.1 常规细胞生物学实验方法 | 第36-38页 |
| 2.5.2 NDV病毒实验方法 | 第38-40页 |
| 2.5.3 F48E9毒株体外抑制CT26小鼠结肠癌细胞的生长 | 第40-41页 |
| 2.5.4 F48E9溶瘤株对BALB/c小鼠的动物实验 | 第41-43页 |
| 2.5.5 实验动物的病理分析 | 第43-45页 |
| 2.5.6 分子克隆相关实验 | 第45-49页 |
| 2.5.7 F48E9株病毒重组实验 | 第49-51页 |
| 2.5.8 表达新城疫辅助蛋白稳定细胞株的构建 | 第51-53页 |
| 2.5.9 基于辅助蛋白稳定表达细胞株BHK21-P8NPI0L2的病毒重组 | 第53页 |
| 2.6 数据处理及统计方法 | 第53-54页 |
| 第三章 结果与分析 | 第54-77页 |
| 第一部分 新城疫F48E9用于肠癌的治疗研究 | 第54-64页 |
| 3.1 新城疫溶瘤株的培养和滴定 | 第54-55页 |
| 3.2 F48E9株对CT26细胞的体外感染抑制实验 | 第55-57页 |
| 3.3 FACS检测F48E9溶瘤株诱导CT26肿瘤细胞凋亡 | 第57-58页 |
| 3.4 F48E9对CT26结肠癌小鼠模型的体内治疗 | 第58-60页 |
| 3.5 F48E9对CT26结肠癌体内治疗的免疫组化分析 | 第60-61页 |
| 3.6 F48E9的小鼠体内安全性分析 | 第61-63页 |
| 第一部分小结 | 第63-64页 |
| 第二部分 新城疫F48E9株反向遗传系统的构建 | 第64-77页 |
| 3.7 F48E9基因组克隆的构建 | 第64-68页 |
| 3.7.1 F48E9株全长基因组的测序 | 第64页 |
| 3.7.2 选择F48E9株反向遗传系统构建载体 | 第64-65页 |
| 3.7.3 F48E9基因组亚克隆的宿主菌的生长抑制 | 第65-67页 |
| 3.7.4 F48E9全基因组克隆的构建 | 第67页 |
| 3.7.5 辅助质粒克隆的构建 | 第67-68页 |
| 3.8 F48E9株病毒重组实验 | 第68-71页 |
| 3.8.1 病毒重组细胞的筛选 | 第68-69页 |
| 3.8.2 四质粒共同转染NDV敏感型宿主细胞 | 第69-70页 |
| 3.8.3 辅助质粒pCI-NP在真核细胞中的表达分析 | 第70-71页 |
| 3.9 稳定表达新城疫辅助蛋白的细胞株构建 | 第71-74页 |
| 3.9.1 构建稳定表达新城疫辅助蛋白的真核表达载体 | 第71-72页 |
| 3.9.2 稳定表达F48E9辅助蛋白稳定细胞株的构建 | 第72-73页 |
| 3.9.3 稳定细胞株中NP蛋白的表达鉴定 | 第73-74页 |
| 3.10 基于辅助蛋白稳定表达细胞株BHK21-P8NP10的病毒重组实验 | 第74-75页 |
| 第二部分小结 | 第75-77页 |
| 第四章 讨论 | 第77-80页 |
| 4.1 研究新城疫病毒强度株用于溶瘤治疗的重要性 | 第77页 |
| 4.2 新城疫强毒株F48E9应用于溶瘤治疗的机遇与挑战 | 第77-78页 |
| 4.3 新城疫F48E9株溶瘤作用机制分析 | 第78页 |
| 4.4 新城疫F48E9株基因组亚克隆对DH5α感受态的生长抑制分析 | 第78页 |
| 4.5 新城疫F48E9株的反向遗传系统的挑战与应对策略 | 第78-80页 |
| 总结和展望 | 第80-82页 |
| 研究总结 | 第80-81页 |
| 展望 | 第81-82页 |
| 参考文献 | 第82-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
