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杨树转AtGolS2和SRK2C基因的遗传转化研究

致谢第1-4页
摘要第4-5页
Abstract第5-10页
第一章 文献综述第10-26页
 1 目前林木常规育种和转基因育种的情况第10-11页
   ·常规育种第10页
   ·转基因育种第10-11页
 2 遗传转化技术第11-13页
   ·农杆菌介导法第11页
   ·原生质体转化法第11-12页
   ·基因枪法第12页
   ·花粉管道法第12-13页
   ·电击法第13页
   ·SAAT 法第13页
 3 非生物胁迫下编码逆境蛋白的相关基因第13-20页
   ·渗透调节基因第13-16页
     ·脯氨酸合成相关基因第14页
     ·甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)第14-15页
     ·编码基因甘露醇-1-磷酸脱氢酶基因(MtlD)第15页
     ·肌醇甲基转移酶基因(Imtl 基因)第15页
     ·果聚糖蔗糖转移酶基因(SacB 基因)第15页
     ·AtGolS2 基因第15-16页
   ·活性氧清除的相关基因第16-17页
   ·蛋白激酶基因第17-18页
     ·MAPK 基因第17页
     ·CDPK 基因第17页
     ·RPK 基因第17-18页
     ·核糖体蛋白激酶(ribosomal-protein kinase)基因第18页
     ·转录调控蛋白激酶(transcription-regulation protein kinase)基因第18页
     ·SRK2C 基因第18页
   ·保护生物大分子及膜结构的蛋白质基因第18-19页
     ·抗冻蛋白基因第18-19页
     ·胚胎发育晚期丰富蛋白基因第19页
   ·编码转录因子的调节基因第19-20页
 4 杨树抗性基因工程研究第20-23页
   ·抗虫基因工程第20-21页
   ·抗病基因工程第21-22页
   ·木质素改良基因工程第22页
   ·抗非生物胁迫基因工程第22-23页
 5 转基因的检测第23-25页
   ·外源基因整合的鉴定第23-24页
     ·标记基因第23页
     ·PCR 检测与分子标记第23-24页
     ·Southern 杂交第24页
   ·转基因植株的外源基因表达的检测第24-25页
     ·报告基因的检测第24-25页
     ·外源基因转录的检测第25页
     ·外源基因表达蛋白的检测第25页
 6 本课题研究的意义第25-26页
第二章 南林895 杨遗传转化研究第26-45页
 1 实验材料第26-27页
   ·菌株和质粒第26页
   ·植物材料第26-27页
   ·抗生素第27页
   ·仪器与设备第27页
   ·培养基第27页
     ·植物培养基第27页
     ·细菌培养基第27页
 2 实验方法第27-33页
   ·质粒DNA 的提取第27-28页
   ·目的基因大肠杆菌的转化第28页
     ·大肠杆菌感受态细胞的制备第28页
     ·转化大肠杆菌XL1-blue 感受态细胞第28页
   ·连接产物的检测第28-30页
     ·引物设计第28-29页
     ·PCR 反应体系第29页
     ·PCR 反应程序第29-30页
     ·电泳检测第30页
   ·表达载体转化根癌农杆菌第30页
     ·农杆菌感受态的制备与转化第30页
     ·表达载体转化农杆菌第30页
   ·潮霉素本底浓度的确定第30-31页
     ·叶片分化的潮霉素本底浓度的确定第31页
     ·生根潮霉素本底浓度的确定第31页
   ·抑菌性抗生素的选择第31页
   ·根癌农杆菌 Ti 质粒介导法转化南林 895 杨第31-33页
     ·外植体的制备第31-32页
     ·正负对照的设置第32页
     ·外植体的侵染第32-33页
       ·菌株的活化第32页
       ·菌液的制备第32页
       ·农杆菌侵染和共培养第32页
       ·芽伸长培养第32页
       ·生根培养第32页
       ·继代培养第32-33页
   ·影响农杆菌转化的各个因素第33页
     ·预培养时间第33页
     ·菌液浓度第33页
     ·侵染时间第33页
     ·共培养时间第33页
   ·目的基因在两种农杆菌中的转化效率第33页
 3 结果与分析第33-44页
   ·植物表达载体农杆菌转化第33-34页
   ·潮霉素本底浓度的确定第34-36页
     ·叶片分化的潮霉素本底浓度的确定第34-35页
     ·生根的潮霉素本底浓度的确定第35-36页
   ·抑菌性抗生素的选择第36页
   ·正负对照第36-37页
   ·南林895 杨的遗传转化条件的优化第37-41页
     ·叶片的预培养第37-38页
     ·菌液浓度第38-39页
     ·侵染时间第39-40页
     ·共培养时间第40-41页
   ·转基因杨树的获得第41-44页
 4 讨论第44-45页
第三章 转基因杨树的检测第45-55页
 1 实验材料第45页
   ·植物材料第45页
   ·仪器设备第45页
   ·实验试剂第45页
 2 实验方法第45-50页
   ·转基因杨树总DNA 提取第45-46页
   ·转基因杨树PCR 分子检测第46-47页
     ·引物设计第46页
     ·PCR 反应体系第46页
     ·PCR 反应程序第46-47页
     ·电泳检测第47页
   ·转基因植株的RT-PCR 检测第47-49页
     ·植株总RNA 提取步骤第47-48页
     ·纯化总RNA第48页
     ·反转录反应第48页
     ·RT-PCR 引物第48-49页
     ·反应体系第49页
     ·RT-PCR 反应程序第49页
   ·转基因植株的抗盐性实验第49-50页
 3 结果与分析第50-54页
   ·转基因植株DNA 提取第50页
   ·转基因杨树的PCR 检测第50-51页
   ·转基因植株的RT-PCR 检测第51-52页
     ·转基因植株RNA 提取第51页
     ·转基因植株目的基因的RT-PCR 检测第51-52页
   ·转基因植株的抗盐性实验第52-54页
 4 讨论第54-55页
第四章 结论与展望第55-56页
 1 全文总结第55页
 2 存在的问题和展望第55-56页
参考文献第56-61页
详细摘要第61-63页

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