| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第一章 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 ER研究进展 | 第10-16页 |
| 1.1.1 ER的发现与分布 | 第10页 |
| 1.1.2 ER基因组成及结构特点 | 第10-11页 |
| 1.1.3 ER和癌症 | 第11-13页 |
| 1.1.3.1 ER和乳腺癌 | 第11-12页 |
| 1.1.3.2 ER和结肠癌 | 第12页 |
| 1.1.3.3 ER和子宫内膜癌 | 第12-13页 |
| 1.1.3.4 ER和卵巢癌 | 第13页 |
| 1.1.4 特异性ER单克隆和多克隆抗体的开发和表征 | 第13-16页 |
| 1.1.4.1 通过化学方法鉴定和表征ER | 第13-14页 |
| 1.1.4.2 通过免疫化学方法鉴定和表征ER | 第14页 |
| 1.1.4.3 ER单克隆和多克隆抗体的开发方法 | 第14-15页 |
| 1.1.4.4 ER抗体在各种实验系统中的效用 | 第15-16页 |
| 1.2 课题研究目的意义及内容 | 第16-18页 |
| 1.2.1 本课题研究的目的及意义 | 第16页 |
| 1.2.2 本课题研究的主要内容 | 第16-18页 |
| 第二章 ERα蛋白的克隆表达及纯化 | 第18-32页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第18-21页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1.1 细胞株 | 第18页 |
| 2.1.1.2 菌株和质粒 | 第18页 |
| 2.1.1.3 主要试剂及试剂盒 | 第18-19页 |
| 2.1.1.4 主要溶液和试剂配制 | 第19-20页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第20-21页 |
| 2.2 实验方法 | 第21-27页 |
| 2.2.1 ERα基因的获取 | 第21-23页 |
| 2.2.1.1 细胞总RNA的提取 | 第21页 |
| 2.2.1.2 第一链cDNA的合成 | 第21-22页 |
| 2.2.1.3 ERα基因扩增 | 第22-23页 |
| 2.2.2 pET-27b-ERα的构建 | 第23-25页 |
| 2.2.2.1 pET-27b质粒的制备 | 第23页 |
| 2.2.2.2 DNA限制性内切酶双酶切 | 第23-24页 |
| 2.2.2.3 目的片段与载体连接 | 第24页 |
| 2.2.2.4 超级感受态细胞的制备 | 第24页 |
| 2.2.2.5 pET-27b-ERα重组质粒的转化与提取 | 第24-25页 |
| 2.2.2.6 pET-27b-ERα重组质粒的验证 | 第25页 |
| 2.2.2.7 重组质粒的保存 | 第25页 |
| 2.2.3 重组蛋白的诱导表达 | 第25-27页 |
| 2.2.3.1 重组菌株的获得 | 第25页 |
| 2.2.3.2 重组蛋白的诱导表达 | 第25-26页 |
| 2.2.3.3 重组蛋白表达的检测 | 第26-27页 |
| 2.2.4 重组蛋白的纯化与定量 | 第27页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第27-31页 |
| 2.3.1 ERα基因的PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.3.2 pET-27b-ERα重组质粒的验证 | 第28-30页 |
| 2.3.2.1 双酶切验证与PCR验证 | 第28-29页 |
| 2.3.2.2 测序验证 | 第29-30页 |
| 2.3.3 ERα重组蛋白的诱导表达 | 第30页 |
| 2.3.4 ERα重组蛋白的纯化与定量 | 第30-31页 |
| 2.4 本章小结 | 第31-32页 |
| 第三章 ERα多克隆抗体的制备与应用 | 第32-38页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第32-33页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第32-33页 |
| 3.1.1.1 实验动物 | 第32页 |
| 3.1.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第32页 |
| 3.1.1.3 主要溶液和试剂配制 | 第32-33页 |
| 3.1.2 仪器设备 | 第33页 |
| 3.2 实验方法 | 第33-36页 |
| 3.2.1. 免疫原的预处理 | 第33页 |
| 3.2.2 免疫原的制备 | 第33页 |
| 3.2.3 小鼠的常规基础免疫 | 第33-34页 |
| 3.2.4 间接ELISA法检测抗体效价 | 第34-35页 |
| 3.2.5 抗体的鉴定和评估 | 第35-36页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第36-37页 |
| 3.3.1 间接ELISA法测小鼠血清效价 | 第36页 |
| 3.3.2 IHC法评估ERα抗体 | 第36-37页 |
| 3.4 本章小结 | 第37-38页 |
| 第四章 ERα单克隆抗体的制备与应用 | 第38-48页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第38-39页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第38-39页 |
| 4.1.1.1 细胞株和实验动物 | 第38页 |
| 4.1.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第38页 |
| 4.1.1.3 主要溶液和试剂配制 | 第38-39页 |
| 4.1.2 仪器设备 | 第39页 |
| 4.2 单克隆抗体制备及筛选 | 第39-43页 |
| 4.2.1 饲养层细胞的制备 | 第39页 |
| 4.2.2 细胞融合 | 第39-41页 |
| 4.2.2.1 脾细胞制备 | 第39-40页 |
| 4.2.2.2 骨髓瘤细胞制备 | 第40页 |
| 4.2.2.3 细胞计数(血球计数板计数) | 第40页 |
| 4.2.2.4 PEG促融合 | 第40-41页 |
| 4.2.2.5 细胞铺板 | 第41页 |
| 4.2.3 细胞筛选及扩增 | 第41页 |
| 4.2.4 杂交瘤细胞的克隆化培养 | 第41-42页 |
| 4.2.5 抗体的亚型鉴定 | 第42页 |
| 4.2.6 抗体的制备与纯化 | 第42-43页 |
| 4.2.6.1 体外培养法 | 第42页 |
| 4.2.6.2 小鼠腹水法 | 第42页 |
| 4.2.6.3 抗体纯化 | 第42-43页 |
| 4.2.7 单抗的评估和应用 | 第43页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第43-47页 |
| 4.3.1 细胞融合 | 第43-44页 |
| 4.3.2 抗体的检测 | 第44-45页 |
| 4.3.3 抗体亚型的鉴定 | 第45页 |
| 4.3.4 单抗的腹水诱导及纯化 | 第45-46页 |
| 4.3.5 抗体的应用 | 第46-47页 |
| 4.4 本章小结 | 第47-48页 |
| 结论与展望 | 第48-49页 |
| 结论 | 第48页 |
| 展望 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-57页 |
| 致谢 | 第57-58页 |
| 附录 | 第58-61页 |
| 在读期间已录用论文 | 第61-62页 |
| 个人简历 | 第62页 |
