摘要 | 第4-6页 |
abstract | 第6-7页 |
第1章 引言 | 第12-21页 |
1.1 溶藻弧菌研究概况 | 第12-13页 |
1.1.1 溶藻弧菌的生物学特性 | 第12页 |
1.1.2 溶藻弧菌流行病学 | 第12页 |
1.1.3 溶藻弧菌致病机理 | 第12-13页 |
1.2 溶藻弧菌粘附研究进展 | 第13-14页 |
1.2.1 溶藻弧菌粘附研究概况 | 第13页 |
1.2.2 细菌粘附研究方法 | 第13-14页 |
1.3 细菌SRNA研究进展 | 第14-18页 |
1.3.1 细菌的sRNA的概念及分类 | 第14页 |
1.3.2 细菌sRNA的功能 | 第14-15页 |
1.3.3 sRNA的功能研究 | 第15页 |
1.3.4 细菌sRNA的作用机制 | 第15-16页 |
1.3.5 细菌sRNA的研究技术 | 第16页 |
1.3.6 细菌sRNA的筛选及鉴定方法 | 第16-17页 |
1.3.7 细菌sRNA靶基因的筛选与鉴定 | 第17-18页 |
1.3.8 细菌sRNA的验证 | 第18页 |
1.4 RNA干扰(RNAI) | 第18-20页 |
1.4.1 RNAi的概念 | 第18页 |
1.4.2 RNAi的分子机制 | 第18页 |
1.4.3 RNAi的生物功能 | 第18-19页 |
1.4.4 RNAi技术 | 第19页 |
1.4.5 RNAi技术的应用 | 第19-20页 |
1.5 本研究的目的意义及创新性 | 第20-21页 |
1.5.1 本研究的目的与意义 | 第20页 |
1.5.2 本研究的创新性 | 第20-21页 |
第2章 高通量测序获得溶藻弧菌SRNA的基本信息 | 第21-31页 |
2.1 实验材料 | 第21-22页 |
2.1.1 测序菌株 | 第21页 |
2.1.2 主要试剂和仪器 | 第21-22页 |
2.2 实验流程和信息分析流程 | 第22-23页 |
2.3 结果与分析 | 第23-29页 |
2.3.1 获得sRNA的长度分布 | 第23-24页 |
2.3.2 不同处理组所有候选sRNA和uniq_reads | 第24-25页 |
2.3.3 不同处理组sRNA的差异表达 | 第25-27页 |
2.3.4 不同处理组靶基因的差异表达 | 第27-29页 |
2.3.5 其他数据 | 第29页 |
2.4 讨论 | 第29-31页 |
第3章 溶藻弧菌粘附相关SRNA的预测 | 第31-51页 |
3.1 材料与方法 | 第31-32页 |
3.1.1 实验用菌 | 第31页 |
3.1.2 主要试剂 | 第31页 |
3.1.3 主要仪器 | 第31-32页 |
3.2 实验方法与步骤 | 第32-35页 |
3.2.1 sRNA表达分析 | 第32页 |
3.2.2 sRNA二级结构预测 | 第32页 |
3.2.3 sRNA靶基因预测及功能分析 | 第32-33页 |
3.2.4 定量RT-PCR分析 | 第33-35页 |
3.2.5 数据处理 | 第35页 |
3.3 结果与分析 | 第35-48页 |
3.3.1 sRNA的差异表达 | 第35-36页 |
3.3.2 sRNA比对 | 第36-37页 |
3.3.3 sRNA靶基因 | 第37-39页 |
3.3.4 sRNA二级结构预测 | 第39-42页 |
3.3.5 QPCR分析 | 第42页 |
3.3.6 靶基因GO分析 | 第42-45页 |
3.3.7 靶基因KEGG分析 | 第45-46页 |
3.3.8 靶基因COG功能划分 | 第46-48页 |
3.4 讨论 | 第48-51页 |
第4章 SRNA对趋化通路中粘附相关基因的抑制作用 | 第51-66页 |
4.1 实验材料与方法 | 第51-52页 |
4.1.1 实验用菌和鱼 | 第51页 |
4.1.2 主要试剂 | 第51-52页 |
4.1.3 主要仪器 | 第52页 |
4.2 实验方法与步骤 | 第52-59页 |
4.2.1 通路分析 | 第52页 |
4.2.2 基因沉默 | 第52-53页 |
4.2.3 溶藻弧菌总RNA提取 | 第53-54页 |
4.2.4 反转录 | 第54-55页 |
4.2.5 PCR扩增 | 第55-56页 |
4.2.6 PCR产物回收 | 第56页 |
4.2.7 sRNA和靶基因定量RT-PCR分析 | 第56-58页 |
4.2.8 溶藻弧菌对大黄鱼表皮粘液的粘附实验 | 第58-59页 |
4.3 结果与分析 | 第59-64页 |
4.3.1 趋化通路 | 第59-60页 |
4.3.2 sRNA和靶基因QPCR | 第60页 |
4.3.3 sRNA二级结构预测 | 第60-61页 |
4.3.4 候选sRNA907基因沉默和QPCR | 第61-62页 |
4.3.5 候选sRNA431基因沉默和QPCR | 第62-63页 |
4.3.6 候选sRNA103基因沉默和QPCR | 第63页 |
4.3.7 粘附实验 | 第63-64页 |
4.4 讨论 | 第64-66页 |
第5章 结论与展望 | 第66-67页 |
5.1 结论 | 第66页 |
5.2 展望 | 第66-67页 |
致谢 | 第67-68页 |
参考文献 | 第68-77页 |
在学期间发表的学术论文 | 第77页 |