| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 英文缩略词表 | 第11-13页 |
| 绪论 | 第13-15页 |
| 1.实验材料 | 第15-23页 |
| 1.1 主要设备及仪器 | 第15-16页 |
| 1.2 主要材料试剂 | 第16-17页 |
| 1.3 试剂配制 | 第17-23页 |
| 2.实验方法 | 第23-41页 |
| 2.1 细胞培养实验 | 第23-24页 |
| 2.1.1 细胞生长条件 | 第23页 |
| 2.1.2 细胞复苏 | 第23页 |
| 2.1.3 细胞传代 | 第23页 |
| 2.1.4 细胞冻存 | 第23-24页 |
| 2.2 RNA的提取及反转录PCR | 第24-25页 |
| 2.2.1 细胞中总RNA的提取 | 第24页 |
| 2.2.2 反转录PCR合成cDNA | 第24-25页 |
| 2.3 大肠杆菌感受态的制备 | 第25页 |
| 2.4 质粒的构建 | 第25-33页 |
| 2.4.1 构建pSecTag2A-PTEN-L-p53质粒 | 第25-30页 |
| 2.4.2 构建pcDNA3.1-TP53质粒 | 第30-32页 |
| 2.4.3 构建T-TP53~(R273H)质粒 | 第32-33页 |
| 2.5 细胞转染 | 第33-34页 |
| 2.6 免疫印迹实验 | 第34-36页 |
| 2.7 超滤浓缩培养基并采用浓缩液处理U251细胞 | 第36页 |
| 2.8 核质分离实验 | 第36-37页 |
| 2.9 生长曲线 | 第37页 |
| 2.9.1 通过细胞计数的方法检测过表达TP53及PTEN-L-p53基因对U251细胞增殖的影响 | 第37页 |
| 2.9.2 通过细胞计数的方法检测PTEN-L-p53对U251细胞增殖的影响 | 第37页 |
| 2.10 CCK8实验 | 第37-38页 |
| 2.10.1 通过CCK8实验检测过表达TP53及PTEN-L-p53基因对U251细胞增殖的影响 | 第37-38页 |
| 2.10.2 通过CCK8实验检测PTEN-L-p53对U251细胞增殖的影响 | 第38页 |
| 2.11 划痕实验 | 第38页 |
| 2.11.1 通过划痕实验检测过表达TP53及PTEN-L-p53基因对U251细胞迁移的影响 | 第38页 |
| 2.11.2 通过划痕实验检测PTEN-L-p53对U251细胞迁移的影响 | 第38页 |
| 2.12 侵袭实验 | 第38-39页 |
| 2.12.1 通过Transwel实验检测过表达TP53及PTEN-L-p53基因对U251细胞侵袭的影响 | 第38-39页 |
| 2.12.2 通过Transwell实验检测PTEN-L-p53对U251细胞侵袭的影响 | 第39页 |
| 2.13 统计分析 | 第39-41页 |
| 3.实验设计思路 | 第41-43页 |
| 4.实验结果 | 第43-53页 |
| 4.1 融合PTEN-Lleader与TP53获得PTEN-L-p53 | 第43页 |
| 4.2 构建pSecTag2A-PTEN-L-p53质粒 | 第43-44页 |
| 4.3 构建pcDNA3.1-TP53质粒 | 第44-45页 |
| 4.4 PTEN-L-p53在HEK293T细胞中过表达 | 第45-46页 |
| 4.5 PTEN-L-p53能够重新进入受体细胞 | 第46-47页 |
| 4.6 U251细胞表达突变的p53(TP53~(R273H)) | 第47-48页 |
| 4.7 PTEN-L-p53抑制U251细胞的增殖 | 第48-50页 |
| 4.8 PTEN-L-p53抑制U251细胞的迁移 | 第50-52页 |
| 4.9 PTEN-L-p53抑制U251细胞的侵袭 | 第52-53页 |
| 5.讨论 | 第53-57页 |
| 6.结论 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 综述 | 第63-73页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-75页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第75-76页 |
