| 摘要 | 第7-8页 |
| ABSTRACT | 第8页 |
| 缩略语 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第10-28页 |
| 1.1 植物和微生物的共生 | 第10-11页 |
| 1.2 豆科植物与根瘤菌共生形成根瘤 | 第11-15页 |
| 1.2.1 根瘤的形成过程 | 第11-15页 |
| 1.3 菌根真菌与植物的共生 | 第15-17页 |
| 1.4 菌根共生和根瘤共生之间的关系 | 第17-18页 |
| 1.5 磷营养 | 第18-25页 |
| 1.5.1 磷对植物的影响 | 第19-22页 |
| 1.5.2 磷转运蛋白的研究 | 第22-25页 |
| 1.5.2.1 植物中的磷转运蛋白 | 第22-25页 |
| 1.5.2.2 真菌中的磷转运蛋白 | 第25页 |
| 1.6 研究基础 | 第25-26页 |
| 1.7 研究的目的和意义 | 第26-27页 |
| 1.8 技术路线 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-43页 |
| 2.1 材料 | 第28-31页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第28页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第28-29页 |
| 2.1.3 供试试剂 | 第29-31页 |
| 2.1.3.1 培养基和抗生素 | 第29-30页 |
| 2.1.3.2 大肠杆菌质粒提取试剂 | 第30页 |
| 2.1.3.3 阳性根鉴定试剂 | 第30-31页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第31页 |
| 2.2 试验方法 | 第31-43页 |
| 2.2.1 分子生物学基本操作 | 第31-34页 |
| 2.2.1.1 化转感受态制备 | 第31-32页 |
| 2.2.1.2 质粒转化 | 第32页 |
| 2.2.1.3 质粒DNA的抽提 | 第32-33页 |
| 2.2.1.4 电转感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.2.1.5 质粒的电击转化 | 第33-34页 |
| 2.2.2 盆栽试验 | 第34页 |
| 2.2.3 紫云英基因组DNA的提取 | 第34-35页 |
| 2.2.4 Trizol法抽提植物总RNA | 第35-36页 |
| 2.2.5 反转录 | 第36页 |
| 2.2.6 AsPT65'UTR和3'UTR的扩增 | 第36-37页 |
| 2.2.7 荧光定量PCR | 第37-38页 |
| 2.2.8 AsPT6功能鉴定载体构建 | 第38-39页 |
| 2.2.8.1 构建启动子组织定位载体 | 第38页 |
| 2.2.8.2 构建AsPT6超表达载体 | 第38页 |
| 2.2.8.3 构建AsPT6干扰载体 | 第38-39页 |
| 2.2.9 发根农杆菌介导的紫云英转化实验 | 第39页 |
| 2.2.10 紫云英启动子化学组织定位 | 第39-40页 |
| 2.2.11 乙炔还原法测定固氮酶活 | 第40页 |
| 2.2.12 GigmPT的根瘤菌表达体系 | 第40-42页 |
| 2.2.12.1 构建根瘤菌表达载体 | 第40页 |
| 2.2.12.2 构建根瘤菌突变株 | 第40-41页 |
| 2.2.12.3 GigmPT盆栽实验 | 第41-42页 |
| 2.2.13 根瘤菌生长曲线测定 | 第42-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-71页 |
| 第一节 AsPT6对紫云英结瘤固氮的调控机制研究 | 第43-59页 |
| 3.1 AsPT6基因的扩增和生物信息学分析 | 第43-45页 |
| 3.2 AsPT6基因的时空表达分析 | 第45-47页 |
| 3.2.1 不同组织AsPT6表达分析 | 第45-46页 |
| 3.2.2 结瘤不同时期AsPT6的表达检测 | 第46-47页 |
| 3.3 AsPT6的化学组织定位分析 | 第47-48页 |
| 3.4 AsPT6超表达对紫云英结瘤固氮的影响 | 第48-52页 |
| 3.4.1 超表达植株AsPT6转录水平检测 | 第49-50页 |
| 3.4.2 超表达植株生长及结瘤固氮表型分析 | 第50-52页 |
| 3.5 AsPT6干扰影响紫云英的结瘤固氮 | 第52-59页 |
| 3.5.1 AsPT6的3'端干扰对于紫云英结瘤固氮的影响 | 第53-57页 |
| 3.5.1.1 3 'RNAi植株AsPT6的转录水平检测 | 第53页 |
| 3.5.1.2 3 'RNAi植株生长及结瘤固氮表型分析 | 第53-57页 |
| 3.5.2 AsPT6的5'端干扰对于紫云英结瘤固氮的影响 | 第57-59页 |
| 第二节 GigmPT在豆科植物中的应用研究 | 第59-71页 |
| 3.6 GigmPT对豆科植物生长和结瘤固氮的影响 | 第59-64页 |
| 3.6.1 GigmPT对紫云英结瘤固氮的影响 | 第59-62页 |
| 3.6.2 GigmPT对蒺藜苜蓿结瘤固氮的影响 | 第62-64页 |
| 3.7 GigmPT对根瘤菌生长的影响 | 第64-65页 |
| 3.8 扩大接种量后GigmPT对豆科植物的结瘤固氮的影响 | 第65-71页 |
| 3.8.1 对紫云英结瘤固氮影响 | 第65-67页 |
| 3.8.2 对苜蓿结瘤固氮影响 | 第67-69页 |
| 3.8.3 对大豆结瘤固氮的影响 | 第69-71页 |
| 4 讨论与展望 | 第71-75页 |
| 4.1 低磷抑制植物生长和结瘤固氮 | 第71页 |
| 4.2 AsPT6的表达影响紫云英生长 | 第71-72页 |
| 4.3 AsPT6影响紫玉英根瘤的发育和固氮活性 | 第72-73页 |
| 4.4 GigmPT影响根瘤菌生长 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-86页 |
| 附录一 本研究所用引物 | 第86-87页 |
| 附录二 AsPT6的核苷酸序列 | 第87-90页 |
| 附录三 文章发表情况 | 第90-91页 |
| 致谢 | 第91页 |
