| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 1 引言 | 第11-21页 |
| 1.1 稻瘟病概况 | 第11页 |
| 1.2 植物的先天免疫 | 第11-13页 |
| 1.3 效应子的类型 | 第13-14页 |
| 1.3.1 异构效应子(Allosteric effectors) | 第13页 |
| 1.3.2 细菌效应子(Bacterial effectors) | 第13页 |
| 1.3.3 真菌效应子(Fugal effectors) | 第13-14页 |
| 1.4 稻瘟病菌效应蛋白 | 第14-17页 |
| 1.4.1 已克隆到的稻瘟病菌无毒基因 | 第14-15页 |
| 1.4.2 非无毒基因效应因子 | 第15页 |
| 1.4.3 稻瘟病菌LXAR效应因子的发现 | 第15-17页 |
| 1.5 RNAi干扰技术 | 第17-18页 |
| 1.6 研究基础与研究意义 | 第18-21页 |
| 1.6.1 本研究已有进展 | 第18-20页 |
| 1.6.2 本研究的意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 供试菌株 | 第21页 |
| 2.1.2 供试载体 | 第21页 |
| 2.1.3 供试植物 | 第21页 |
| 2.1.4 供试生化试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.5 常用培养基配方 | 第22-24页 |
| 2.1.5.1 细菌培养基 | 第22-23页 |
| 2.1.5.2 菌丝生长培养基 | 第23页 |
| 2.1.5.3 产孢培养基 | 第23-24页 |
| 2.1.5.4 原生质体再生培养基 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-38页 |
| 2.2.1 稻瘟病菌总DNA的提取 | 第24-26页 |
| 2.2.1.1 DNA的粗提 | 第24-25页 |
| 2.2.1.2 DNA的精提 | 第25-26页 |
| 2.2.2 琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
| 2.2.3 Southern杂交 | 第26-29页 |
| 2.2.3.1 探针的扩增及制备 | 第26-27页 |
| 2.2.3.2 DNA的酶切及电泳 | 第27页 |
| 2.2.3.3 DNA变性及转膜 | 第27-28页 |
| 2.2.3.4 固定DNA于膜上 | 第28页 |
| 2.2.3.5 预杂交 | 第28页 |
| 2.2.3.6 杂交及洗膜 | 第28-29页 |
| 2.2.3.7 免疫显色 | 第29页 |
| 2.2.4 MoLLEs互补及RNAi突变体的构建 | 第29-31页 |
| 2.2.4.1 MoLLE1和MoLLE3互补载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.4.2 MoLLE2 RNA干扰载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.5 大肠杆菌超级感受态的制备和转化 | 第31-32页 |
| 2.2.5.1 超感的制备 | 第31-32页 |
| 2.2.5.2 大肠杆菌的转化 | 第32页 |
| 2.2.6 稻瘟病菌原生质体的制备和转化 | 第32-34页 |
| 2.2.6.1 稻瘟病菌原生质体的制备 | 第32-33页 |
| 2.2.6.2 稻瘟病菌原生质体的转化及其验证 | 第33-34页 |
| 2.2.7 PCR | 第34页 |
| 2.2.8 连接反应 | 第34-35页 |
| 2.2.9 转化子的表型分析 | 第35-36页 |
| 2.2.9.1 稻瘟病菌生长速率的测定 | 第35页 |
| 2.2.9.2 产孢量统计 | 第35页 |
| 2.2.9.3 细胞壁敏感性分析 | 第35-36页 |
| 2.2.9.4 附着胞形成率分析 | 第36页 |
| 2.2.9.5 致病菌分析 | 第36页 |
| 2.2.10 DNA的纯化回收和质粒提取 | 第36-37页 |
| 2.2.11 数据分析 | 第37-38页 |
| 3 结果与分析 | 第38-60页 |
| 3.1 MoLLE1、MoLLE2和MoLLE3三者的序列相似性分析 | 第38页 |
| 3.2 候选激发子MoLLE1的功能 | 第38-45页 |
| 3.2.1 MoLLE1互补转化子的获得与鉴定 | 第38-40页 |
| 3.2.2 MoLLE1敲除突变体及过表达菌株的表型 | 第40-45页 |
| 3.2.2.1 MoLLE1的菌落形态及生长速率 | 第40-41页 |
| 3.2.2.2 MoLLE1的产孢量 | 第41-42页 |
| 3.2.2.3 MoLLE1的附着胞形成观察与统计 | 第42-43页 |
| 3.2.2.4 MoLLE1的细胞壁敏感性 | 第43-44页 |
| 3.2.2.5 MoLLE1的致病性 | 第44-45页 |
| 3.3 候选激发子MoLLE2的功能 | 第45-51页 |
| 3.3.1 MoLLE2 RNAi突变体的构建与鉴定 | 第45-47页 |
| 3.3.2 MoLLE2 RNAi突变体的表型 | 第47-49页 |
| 3.3.2.1 MoLLE2 RNAi突变体的菌落形态及生长速率 | 第47-48页 |
| 3.3.2.2 MoLLE2的RNAi突变体的产孢量 | 第48-49页 |
| 3.3.2.3 MoLLE2的RNAi突变体的致病性 | 第49页 |
| 3.3.3 MoLLE2几个RNAi突变体的表达量 | 第49-51页 |
| 3.4 候选激发子MoLLE3的功能 | 第51-60页 |
| 3.4.1 MoLLE3的互补转化子的构建与鉴定 | 第51-52页 |
| 3.4.2 MoLLE3敲除突变体及过表达菌株的表型 | 第52-57页 |
| 3.4.2.1 MoLLE3的菌落形态及生长速率 | 第52-53页 |
| 3.4.2.2 MoLLE3的产孢量 | 第53页 |
| 3.4.2.3 MoLLE3的细胞壁敏感性 | 第53-54页 |
| 3.4.2.4 MoLLE3的致病性 | 第54-57页 |
| 3.4.3 LXAR对MoLLE3功能的影响 | 第57-60页 |
| 3.4.3.1 点突变LXAR突变体的构建 | 第57页 |
| 3.4.3.2 点突变LXAR对稻瘟病菌功能的影响 | 第57-60页 |
| 4 讨论与小结 | 第60-63页 |
| 4.1 MoLLEs对稻瘟病菌菌丝生长影响 | 第60-61页 |
| 4.2 MoLLEs对稻瘟病菌菌分生孢子的影响 | 第61页 |
| 4.3 MoLLEs对稻瘟病菌致病性的影响 | 第61-62页 |
| 4.4 LXAR基序对候选激发子MoLLEs功能的影响 | 第62-63页 |
| 5 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68页 |
