| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 真核翻译延伸因子(eEFs)的研究概况 | 第11-18页 |
| 1.1.1 eEF1A亚型、结构和作用 | 第11-12页 |
| 1.1.1.1 eEF1A在蛋白质合成中的作用 | 第11页 |
| 1.1.1.2 eEF1A亚型和结构 | 第11-12页 |
| 1.1.2 eEF1与病毒互作的研究进展 | 第12-16页 |
| 1.1.2.1 RNA病毒的一般特征 | 第12页 |
| 1.1.2.2 eEF1与病毒RNA互作 | 第12-13页 |
| 1.1.2.3 eEF1与病毒蛋白互作影响复制 | 第13-14页 |
| 1.1.2.4 eEF1与病毒聚合酶互作 | 第14页 |
| 1.1.2.5 eEF1与其他病毒结构和非结构蛋白互作 | 第14-16页 |
| 1.1.3 eEF1的功能 | 第16-18页 |
| 1.1.3.1 eEF1促进病毒RC组装 | 第16页 |
| 1.1.3.2 eEF1在病毒蛋白复合体中的功能 | 第16-17页 |
| 1.1.3.3 eEF1促进病毒粒子组装 | 第17页 |
| 1.1.3.4 eEF1在病毒致病机制中作用 | 第17-18页 |
| 1.2 中国小麦花叶病毒(CWMV)的研究概况 | 第18-20页 |
| 1.2.1 CWMV的田间症状 | 第18-19页 |
| 1.2.2 CWMV病毒基因组结构 | 第19页 |
| 1.2.3 CWMV编码的蛋白 | 第19-20页 |
| 1.2.3.1 病毒复制酶(ViralReplicase) | 第19-20页 |
| 1.2.3.2 运动蛋白(MP) | 第20页 |
| 1.2.3.3 外壳蛋白及其相关蛋白 | 第20页 |
| 1.2.3.4 富含半胱氨酸蛋白(CRP) | 第20页 |
| 1.3 本文的研究意义 | 第20-21页 |
| 第2章 小麦TaeEF1B基因的克隆及表达分析 | 第21-33页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 材料与方法 | 第21-30页 |
| 2.2.1 材料 | 第21-22页 |
| 2.2.2 方法 | 第22-27页 |
| 2.2.2.1 设计引物 | 第22页 |
| 2.2.2.2 TRIzol法提取小麦组织TotalRNA | 第22-23页 |
| 2.2.2.3 RT-PCR | 第23页 |
| 2.2.2.4 基因扩增与纯化 | 第23-25页 |
| 2.2.2.5 构建克隆载体 | 第25-27页 |
| 2.2.2.6 TaeEF1B的同源性分析 | 第27页 |
| 2.2.2.7 实时荧光定量PCR | 第27页 |
| 2.2.3 结果与分析 | 第27-30页 |
| 2.2.3.1 小麦eEF1B基因的克隆 | 第27-28页 |
| 2.2.3.2 小麦TaeEF1B同源序列的分析 | 第28-30页 |
| 2.2.3.3 TaeEF1B在小麦组织中的表达差异性分析 | 第30页 |
| 2.3 小结与讨论 | 第30-33页 |
| 第3章 TaeEF1B的原核表达及其蛋白质纯化 | 第33-41页 |
| 3.1 引言 | 第33页 |
| 3.2 材料与方法 | 第33-37页 |
| 3.2.1 材料 | 第33页 |
| 3.2.2 方法 | 第33-37页 |
| 3.2.2.1 设计引物 | 第33-34页 |
| 3.2.2.2 TRIzol法提取小麦TotalRNA | 第34页 |
| 3.2.2.3 扩增目的基因及纯化 | 第34-35页 |
| 3.2.2.4 克隆载体的构建 | 第35页 |
| 3.2.2.5 重组载体pGEX-6P-1:TaeEF1B的构建 | 第35-37页 |
| 3.3 结果与分析 | 第37-39页 |
| 3.3.1 重组载体pGEX-6P-1:TaeEF1B的构建 | 第37页 |
| 3.3.2 TaeEF1B蛋白的原核表达和鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3.3 TaeEF1B蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 3.4 小结与讨论 | 第39-41页 |
| 第4章 TaeEF1B与CWMV的互作分析 | 第41-55页 |
| 4.1 引言 | 第41页 |
| 4.2 材料与方法 | 第41-48页 |
| 4.2.1 材料 | 第41页 |
| 4.2.2 方法 | 第41-48页 |
| 4.2.2.1 引物设计 | 第41-42页 |
| 4.2.2.2 目的基因的扩增与纯化 | 第42页 |
| 4.2.2.3 构建酵母表达载体 | 第42-43页 |
| 4.2.2.4 EMSADNA-蛋白结合实验 | 第43-46页 |
| 4.2.2.5 体外转录 | 第46页 |
| 4.2.2.6 EMSARNA-蛋白结合实验 | 第46-48页 |
| 4.3 结果与分析 | 第48-53页 |
| 4.3.1 TaeEF1B与CWMV编码的RdRp蛋白在酵母细胞中不存在互作 | 第48-49页 |
| 4.3.2 TaeEF1B与CWMV3’UTR区的RNA互作分析 | 第49-51页 |
| 4.3.3 TaeEF1B与CWMV3’UTR、5’UTR和ORF区的DNA互作分析 | 第51-52页 |
| 4.3.4 TaeEF1B与CWMV5’UTR和ORF区的RNA互作分析 | 第52-53页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第53-55页 |
| 第5章 NbeEF1B对CWMV复制的影响 | 第55-65页 |
| 5.1 引言 | 第55页 |
| 5.2 材料与方法 | 第55-60页 |
| 5.2.1 材料 | 第55-56页 |
| 5.2.2 方法 | 第56-60页 |
| 5.2.2.1 引物设计 | 第56页 |
| 5.2.2.2 目的基因的扩增与纯化 | 第56页 |
| 5.2.2.3 构建烟草TRVVIGS:NbeEF1B载体 | 第56-58页 |
| 5.2.2.3 农杆菌浸润法接种 | 第58页 |
| 5.2.2.4 构建烟草NbeEF1B过表达载体GFP:NbeEF1B | 第58页 |
| 5.2.2.5 实时荧光定量PCR | 第58页 |
| 5.2.2.6 Northern Blotting检测 | 第58-60页 |
| 5.3 结果与分析 | 第60-64页 |
| 5.3.1 在本氏烟中沉默NbeEF1B基因抑制CWMV的复制 | 第60-62页 |
| 5.3.2 在本氏烟中过表达NbeEF1B基因促进CWMV的复制 | 第62-64页 |
| 5.4 小结与讨论 | 第64-65页 |
| 第6章 总结与展望 | 第65-67页 |
| 6.1 总结 | 第65页 |
| 6.2 展望 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-77页 |
| 附录 | 第77-79页 |
| 主要仪器 | 第79-85页 |
| 中英文对照 | 第85-89页 |
| 致谢 | 第89-91页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第91页 |
