中文摘要 | 第4-6页 |
abstract | 第6-7页 |
第一章 引言 | 第11-12页 |
第二章 材料与方法 | 第12-27页 |
2.1 实验对象 | 第12页 |
2.2 细胞培养 | 第12页 |
2.2.1 实验试剂 | 第12页 |
2.2.2 仪器及耗材 | 第12页 |
2.2.3 培养方法 | 第12页 |
2.3 氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型的建立 | 第12-13页 |
2.3.1 实验试剂 | 第12-13页 |
2.3.2 实验仪器 | 第13页 |
2.3.3 实验分组 | 第13页 |
2.3.4 造模方法 | 第13页 |
2.4 光学显微镜下观察心肌细胞形态学的变化 | 第13-14页 |
2.4.1 实验仪器 | 第13-14页 |
2.4.2 实验方法 | 第14页 |
2.5 甲基噻唑蓝比色法(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyltetrazolium bromide,MTT)检测细胞活力 | 第14页 |
2.5.1 实验试剂 | 第14页 |
2.5.2 实验仪器 | 第14页 |
2.5.3 实验方法 | 第14页 |
2.6 2,4-二硝基苯肼显色法检测培养液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放率 | 第14-15页 |
2.6.1 实验试剂 | 第14-15页 |
2.6.2 实验仪器 | 第15页 |
2.6.3 实验方法 | 第15页 |
2.7 钙成像记录 | 第15-17页 |
2.7.1 实验试剂 | 第15页 |
2.7.2 实验仪器 | 第15-16页 |
2.7.3 实验方法 | 第16页 |
2.7.4 实验试剂(钙成像第二部分) | 第16页 |
2.7.5 实验仪器(钙成像第二部分) | 第16-17页 |
2.7.6 实验方法 | 第17页 |
2.8 Q-PCR检测mRNA表达水平 | 第17-19页 |
2.8.1 实验试剂 | 第17页 |
2.8.2 PCR引物 | 第17页 |
2.8.3 实验仪器 | 第17-18页 |
2.8.4 实验方法 | 第18-19页 |
2.9 Western Blotting检测蛋白表达水平 | 第19-24页 |
2.9.1 实验试剂 | 第19-21页 |
2.9.2 实验仪器 | 第21页 |
2.9.3 实验方法 | 第21-24页 |
2.10 基因沉默 | 第24-26页 |
2.10.1 实验试剂 | 第24-25页 |
2.10.2 实验分组 | 第25页 |
2.10.3 实验方法(以6孔板为例) | 第25-26页 |
2.11 统计方法 | 第26-27页 |
第三章 结果 | 第27-40页 |
3.1 Dex预处理能减轻H9C2心肌细胞OGD/R损伤并参与细胞内的钙调控 | 第27-31页 |
3.1.1 细胞活力(MTT法检测)随着缺氧/复氧时间的变化情况 | 第27-28页 |
3.1.2 光学显微镜下细胞形态学的变化 | 第28页 |
3.1.3 Dex预处理能显著提高心肌细胞活力,减少LDH释放率 | 第28-29页 |
3.1.4 Dex预处理能明显抑制细胞内钙超载 | 第29-31页 |
3.2 Dex参与对心肌细胞内FKBP12.6及RyR2的表达调控 | 第31-33页 |
3.2.1 Dex预处理能上调FKBP12.6在mRNA及蛋白水平的表达 | 第31-32页 |
3.2.2 Dex预处理能抑制p-S2814RyR2及凋亡因子Cleaved-Caspase-3的蛋白表达 | 第32-33页 |
3.3 基因沉默FKBP12.6能反转Dex对OGD/R心肌细胞的保护作用 | 第33-40页 |
3.3.1 Real-timePCR法检测FKBP12.6基因沉默效率,确定转染时间 | 第33-34页 |
3.3.2 基因沉默FKBP12.6,MTT法检测细胞活力及2,4-二硝基苯肼显色法检测培养液LDH释放率的结果 | 第34-35页 |
3.3.3 基因沉默FKBP12.6,钙成像法检测细胞内钙离子 | 第35-37页 |
3.3.4 基因沉默FKBP12.6,Western blotting检测RyR2、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3的蛋白表达及RyR2磷酸化的改变 | 第37-40页 |
第四章 讨论 | 第40-44页 |
总结 | 第44-45页 |
参考文献 | 第45-49页 |
Review | 第49-63页 |
参考文献 | 第57-63页 |
攻读学位期间公开发表的论文与会议摘要 | 第63-64页 |
致谢 | 第64-67页 |