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右美托咪定预处理抑制RyR2磷酸化减轻H9C2心肌细胞氧糖剥夺/复氧损伤

中文摘要第4-6页
abstract第6-7页
第一章 引言第11-12页
第二章 材料与方法第12-27页
    2.1 实验对象第12页
    2.2 细胞培养第12页
        2.2.1 实验试剂第12页
        2.2.2 仪器及耗材第12页
        2.2.3 培养方法第12页
    2.3 氧糖剥夺/复氧(OGD/R)模型的建立第12-13页
        2.3.1 实验试剂第12-13页
        2.3.2 实验仪器第13页
        2.3.3 实验分组第13页
        2.3.4 造模方法第13页
    2.4 光学显微镜下观察心肌细胞形态学的变化第13-14页
        2.4.1 实验仪器第13-14页
        2.4.2 实验方法第14页
    2.5 甲基噻唑蓝比色法(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5 diphenyltetrazolium bromide,MTT)检测细胞活力第14页
        2.5.1 实验试剂第14页
        2.5.2 实验仪器第14页
        2.5.3 实验方法第14页
    2.6 2,4-二硝基苯肼显色法检测培养液乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放率第14-15页
        2.6.1 实验试剂第14-15页
        2.6.2 实验仪器第15页
        2.6.3 实验方法第15页
    2.7 钙成像记录第15-17页
        2.7.1 实验试剂第15页
        2.7.2 实验仪器第15-16页
        2.7.3 实验方法第16页
        2.7.4 实验试剂(钙成像第二部分)第16页
        2.7.5 实验仪器(钙成像第二部分)第16-17页
        2.7.6 实验方法第17页
    2.8 Q-PCR检测mRNA表达水平第17-19页
        2.8.1 实验试剂第17页
        2.8.2 PCR引物第17页
        2.8.3 实验仪器第17-18页
        2.8.4 实验方法第18-19页
    2.9 Western Blotting检测蛋白表达水平第19-24页
        2.9.1 实验试剂第19-21页
        2.9.2 实验仪器第21页
        2.9.3 实验方法第21-24页
    2.10 基因沉默第24-26页
        2.10.1 实验试剂第24-25页
        2.10.2 实验分组第25页
        2.10.3 实验方法(以6孔板为例)第25-26页
    2.11 统计方法第26-27页
第三章 结果第27-40页
    3.1 Dex预处理能减轻H9C2心肌细胞OGD/R损伤并参与细胞内的钙调控第27-31页
        3.1.1 细胞活力(MTT法检测)随着缺氧/复氧时间的变化情况第27-28页
        3.1.2 光学显微镜下细胞形态学的变化第28页
        3.1.3 Dex预处理能显著提高心肌细胞活力,减少LDH释放率第28-29页
        3.1.4 Dex预处理能明显抑制细胞内钙超载第29-31页
    3.2 Dex参与对心肌细胞内FKBP12.6及RyR2的表达调控第31-33页
        3.2.1 Dex预处理能上调FKBP12.6在mRNA及蛋白水平的表达第31-32页
        3.2.2 Dex预处理能抑制p-S2814RyR2及凋亡因子Cleaved-Caspase-3的蛋白表达第32-33页
    3.3 基因沉默FKBP12.6能反转Dex对OGD/R心肌细胞的保护作用第33-40页
        3.3.1 Real-timePCR法检测FKBP12.6基因沉默效率,确定转染时间第33-34页
        3.3.2 基因沉默FKBP12.6,MTT法检测细胞活力及2,4-二硝基苯肼显色法检测培养液LDH释放率的结果第34-35页
        3.3.3 基因沉默FKBP12.6,钙成像法检测细胞内钙离子第35-37页
        3.3.4 基因沉默FKBP12.6,Western blotting检测RyR2、Caspase-3、Cleaved-Caspase-3的蛋白表达及RyR2磷酸化的改变第37-40页
第四章 讨论第40-44页
总结第44-45页
参考文献第45-49页
Review第49-63页
    参考文献第57-63页
攻读学位期间公开发表的论文与会议摘要第63-64页
致谢第64-67页

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