| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 前言 | 第11-21页 |
| 1.1 核盘菌简介 | 第11-13页 |
| 1.1.1 核盘菌分类与危害 | 第11页 |
| 1.1.2 核盘菌生活史 | 第11-12页 |
| 1.1.3 核盘菌侵染循环 | 第12-13页 |
| 1.2 Ste12和Ste类蛋白的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 Ste12和Ste类蛋白的概述 | 第13-14页 |
| 1.2.2 Ste12转录因子在酵母中的调控作用 | 第14-15页 |
| 1.2.3 Ste12和Ste12类蛋白结合位点研究 | 第15页 |
| 1.3 SsSte12基因研究方法 | 第15-19页 |
| 1.3.1 RNA干扰技术 | 第15-17页 |
| 1.3.2 酵母双杂交技术 | 第17-18页 |
| 1.3.3 双分子荧光互补技术 | 第18-19页 |
| 1.4 本研究目的意义 | 第19-21页 |
| 第2章 核盘菌SsSte12基因克隆及其沉默载体构建 | 第21-34页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 实验菌株与载体 | 第21页 |
| 2.1.2 实验药品与试剂 | 第21页 |
| 2.1.3 实验主要材料配置 | 第21-22页 |
| 2.1.4 实验仪器与设备 | 第22页 |
| 2.1.5 主要引物 | 第22-23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-30页 |
| 2.2.1 核盘菌RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 核盘菌cDNA反转录 | 第24-25页 |
| 2.2.3 SsSte12基因克隆与测序 | 第25-28页 |
| 2.2.4 SsSte12基因沉默载体构建 | 第28-30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-34页 |
| 2.3.1 核盘菌SsSte12基因生物信息学分析 | 第30-31页 |
| 2.3.2 核盘菌SsSte12基因克隆 | 第31-32页 |
| 2.3.3 沉默位点设计 | 第32页 |
| 2.3.4 沉默片段克隆与酶切验证 | 第32-34页 |
| 第3章 筛选鉴定核盘菌SsSte12沉默转化子 | 第34-40页 |
| 3.1 实验材料 | 第34-35页 |
| 3.1.1 实验菌株与载体 | 第34页 |
| 3.1.2 实验药品与试剂 | 第34页 |
| 3.1.3 实验主要材料配置 | 第34-35页 |
| 3.1.4 主要引物 | 第35页 |
| 3.2 实验方法 | 第35-38页 |
| 3.2.1 核盘菌原生质体制备 | 第35-36页 |
| 3.2.2 PEG-CaCl_2介导的核盘菌原生质体转化 | 第36-37页 |
| 3.2.3 沉默转化子筛选及鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-40页 |
| 3.3.1 核盘菌原生质体制备 | 第38页 |
| 3.3.2 沉默转化子阳性克隆PCR检测 | 第38-40页 |
| 第4章 转录因子SsSte12基因功能验证 | 第40-48页 |
| 4.1 实验材料 | 第40-41页 |
| 4.1.1 实验菌株 | 第40页 |
| 4.1.2 实验药品与试剂 | 第40页 |
| 4.1.3 实验主要材料配置 | 第40页 |
| 4.1.4 本章主要引物 | 第40-41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-43页 |
| 4.2.1 RNAi突变体SsSte12基因表达量分析 | 第41页 |
| 4.2.2 RNAi突变体菌落形态及生长速率对比分析 | 第41-42页 |
| 4.2.3 RNAi突变体菌核形成观察 | 第42页 |
| 4.2.4 RNAi突变体菌丝形态以及侵染垫形成显微观察 | 第42页 |
| 4.2.5 RNAi突变体致病力对比分析 | 第42-43页 |
| 4.3 结果与分析 | 第43-48页 |
| 4.3.1 RNAi突变体SsSte12基因表达量分析 | 第43页 |
| 4.3.2 RNAi突变体菌落形态及生长速率对比分析 | 第43-45页 |
| 4.3.3 RNAi突变体菌核形成观察 | 第45-46页 |
| 4.3.4 RNAi突变体菌丝形态以及侵染垫形成显微观察 | 第46-47页 |
| 4.3.5 RNAi突变体菌柱致病力对比分析 | 第47-48页 |
| 第5章 转录因子SsSte12与Ss MCM1互作验证 | 第48-60页 |
| 5.1 实验材料 | 第48-52页 |
| 5.1.1 实验菌株与载体 | 第48页 |
| 5.1.2 实验药品与试剂 | 第48页 |
| 5.1.3 实验主要材料配置 | 第48-51页 |
| 5.1.4 主要引物 | 第51-52页 |
| 5.2 实验方法 | 第52-56页 |
| 5.2.1 酵母共转载体p GAD7T-SsSte12构建 | 第52页 |
| 5.2.2 酵母共转 | 第52-54页 |
| 5.2.3 酵母双杂验证SsSte12和Ss MCM1转录因子互作 | 第54页 |
| 5.2.4 双分子荧光互补载体构建 | 第54-55页 |
| 5.2.5 拟南芥原生质体转化及荧光观察 | 第55-56页 |
| 5.3 结果与分析 | 第56-60页 |
| 5.3.1 Ste12互作蛋白预测 | 第56-57页 |
| 5.3.2 SsSte12和Ss MCM1蛋白相互作用验证 | 第57-58页 |
| 5.3.3 SsSte12和Ss MCM1在核盘菌发育中的表达分析 | 第58-60页 |
| 讨论 | 第60-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-77页 |
| 作者简介 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
