| 中文摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 前言 | 第8-13页 |
| 第二章 实验原理 | 第13-15页 |
| 2.1 基因克隆 | 第13页 |
| 2.2 采用shRNA沉默基因的原理 | 第13页 |
| 2.3 PCR | 第13页 |
| 2.4 基因沉默 | 第13-14页 |
| 2.5 慢病毒载体 | 第14-15页 |
| 第三章 材料与方法 | 第15-28页 |
| 3.1 主要材料 | 第15页 |
| 3.2 主要试剂配制 | 第15-18页 |
| 3.2.1 DMEM高糖型细胞培养基配制 | 第15页 |
| 3.2.2 0.25%胰酶的配制 | 第15页 |
| 3.2.3 PBS缓冲液的配制 | 第15-16页 |
| 3.2.4 LB液体、固体细菌培养基的配制 | 第16页 |
| 3.2.5 1×TAE电泳缓冲液 | 第16页 |
| 3.2.6 溴乙锭(EP)的配制 | 第16页 |
| 3.2.7 6×Loading Buffer配制 | 第16-17页 |
| 3.2.8 1%琼脂糖电泳胶的配制 | 第17页 |
| 3.2.9 氨苄青霉素配制 | 第17页 |
| 3.2.10 0.1mol/LCaCL2的配制 | 第17页 |
| 3.2.11 RPMI1640的配制 | 第17页 |
| 3.2.12 Polybrene的配制 | 第17页 |
| 3.2.13 Puromycin的配制 | 第17-18页 |
| 3.2.14 MTT的配制 | 第18页 |
| 3.3 主要仪器与器材 | 第18-19页 |
| 3.4 试验方法 | 第19-28页 |
| 3.4.1 引物设计、合成及退火 | 第19-20页 |
| 3.4.1.1 引物设计、合成 | 第19-20页 |
| 3.4.1.2 引物的退火 | 第20页 |
| 3.4.2 pLKO.1质粒的扩增、提取与双酶切 | 第20-22页 |
| 3.4.2.1 pLKO.1质粒的扩增 | 第20-21页 |
| 3.4.2.2 pLKO.1质粒的提取 | 第21页 |
| 3.4.2.3 pLKO.1质粒的双酶切 | 第21-22页 |
| 3.4.2.4 pLKO.1质粒的纯化 | 第22页 |
| 3.4.3 目的片段与pLKO.1质粒的连接 | 第22-23页 |
| 3.4.4 重组慢病毒质粒的扩增、提取及胶回收 | 第23-25页 |
| 3.4.4.1 重组慢病毒质粒的扩增 | 第23页 |
| 3.4.4.2 重组慢病毒质粒的提取 | 第23-24页 |
| 3.4.4.3 重组慢病毒质粒的胶回收 | 第24-25页 |
| 3.4.5 重组慢病毒质粒的酶切鉴定、PCR检测及序列分析 | 第25-28页 |
| 3.4.5.1 重组慢病毒质粒PIAS-1-pLK0.1-Puro的酶切鉴定 | 第25页 |
| 3.4.5.2 重组慢病毒质粒PIAS-1-pLK0.1-Puro的PCR检测 | 第25-26页 |
| 3.4.5.3 重组慢病毒质粒PIAS-I-pLK0.1-Puro的提纯并去除内毒素 | 第26-28页 |
| 第四章 结果 | 第28-31页 |
| 4.1 质粒pLKO.1的提取及验证 | 第28页 |
| 4.2 质粒pLKO.1的酶切 | 第28-29页 |
| 4.3 重组慢病毒载体的构建及鉴定 | 第29-30页 |
| 4.4 序列测定及比对 | 第30-31页 |
| 第五章 讨论 | 第31-34页 |
| 第六章 结论 | 第34-35页 |
| 6.1 主要结论 | 第34页 |
| 6.2 局限性 | 第34页 |
| 6.3 展望 | 第34-35页 |
| 中英文缩写词 | 第35-36页 |
| 参考文献 | 第36-38页 |
| 在学期间的研究成果 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39页 |
