摘要 | 第4-6页 |
ABSTRACT | 第6-8页 |
第一章 引言 | 第12-26页 |
1.1 Elp3相关研究进展 | 第12-16页 |
1.1.1 Elongator复合物的发现及结构 | 第12-13页 |
1.1.2 Elp3的功能 | 第13-16页 |
1.2 ROS的产生与氧化应激 | 第16-17页 |
1.2.1 ROS的产生 | 第16-17页 |
1.2.2 氧化应激 | 第17页 |
1.3 酿酒酵母中的氧化应激体系 | 第17-21页 |
1.3.1 参与酿酒酵母氧化应激的主要转录因子 | 第17-19页 |
1.3.2 酿酒酵母中氧化应激的主要通路 | 第19页 |
1.3.3 参与酿酒酵母氧化应激的其他组分 | 第19-21页 |
1.4 参与酿酒酵母氧化应激的两个氧化还原系统 | 第21-22页 |
1.4.1 酿酒酵母中TRX和GSH系统的细胞分布及作用机制 | 第21页 |
1.4.2 酿酒酵母中细胞质的巯基氧化还原控制 | 第21-22页 |
1.4.3 酿酒酵母中线粒体的巯基氧化还原控制 | 第22页 |
1.5 氧化应激与热激之间的相互作用 | 第22-24页 |
1.5.1 酿酒酵母的热激应答反应 | 第22-23页 |
1.5.2 酿酒酵母氧化应激与热激之间的相互作用 | 第23-24页 |
1.6 研究目的及意义 | 第24-26页 |
第二章 材料和方法 | 第26-34页 |
2.1 实验材料 | 第26-29页 |
2.1.1 菌株和质粒 | 第26页 |
2.1.2 引物设计 | 第26-27页 |
2.1.3 试剂和培养基 | 第27-29页 |
2.1.4 实验试剂盒 | 第29页 |
2.1.5 主要仪器设备 | 第29页 |
2.2 试验方法 | 第29-34页 |
2.2.1 DH5α感受态的制备以及质粒的转化 | 第29页 |
2.2.2 质粒的提取 | 第29页 |
2.2.3 酵母的高效转化 | 第29页 |
2.2.4 敏感性检测 | 第29-30页 |
2.2.5 生长曲线的绘制 | 第30页 |
2.2.6 酵母总蛋白的提取 | 第30-31页 |
2.2.7 GPX酶活测定 | 第31页 |
2.2.8 westernblot | 第31页 |
2.2.9 RNA的提取 | 第31页 |
2.2.10 基因表达分析 | 第31-32页 |
2.2.11 Yap1的核定位检测 | 第32页 |
2.2.12 Yap1活性的检测 | 第32-33页 |
2.2.13 MDA的测定 | 第33页 |
2.2.14 ROS的检测 | 第33-34页 |
第三章 结果与分析 | 第34-50页 |
3.1 Elp3缺失对Yap1核定位及活性的影响 | 第34-37页 |
3.1.1 Elp3缺失对Yap1核定位的影响 | 第34-35页 |
3.1.2 Elp3缺失对酵母中转录因子Yap1活性的影响 | 第35页 |
3.1.3 Elp3缺失对Yap1靶基因表达的影响 | 第35-37页 |
3.2 Elp3缺失对SOD和Hsp75、Hsp105表达的影响 | 第37-40页 |
3.2.1 Elp3缺失对SOD基因及蛋白表达的影响 | 第37-39页 |
3.2.2 Elp3缺失对Hsp75、Hsp105蛋白表达的影响 | 第39-40页 |
3.3 Elp3缺失对胞内蛋白含量及GPX酶活影响 | 第40-41页 |
3.4 Elp3缺失对酵母细胞内ROS和MDA的影响 | 第41-43页 |
3.4.1 Elp3缺失对酵母细胞内ROS的影响 | 第41-42页 |
3.4.2 Elp3缺失对酵母细胞内MDA的影响 | 第42-43页 |
3.5 Elp3缺失对二酰胺的敏感性实验和生长曲线的绘制 | 第43-50页 |
3.5.1 elp3△菌株的敏感性实验 | 第43-44页 |
3.5.2 氧化剂和高温胁迫elp3△菌株的生长曲线 | 第44-45页 |
3.5.3 elp3△菌株的功能补偿实验 | 第45-47页 |
3.5.4 elp3△菌株功能补偿菌株的生长曲线 | 第47-50页 |
第四章 讨论 | 第50-56页 |
4.1 Elp3确实参与Yap1的核定位及其活性调控 | 第50-51页 |
4.2 Elp3亚基缺失影响酿酒酵母中SOD、HSP蛋白表达量 | 第51-53页 |
4.3 Elp3亚基缺失对酿酒酵母ROS等生理指标的影响 | 第53-54页 |
4.4 Elp3及其两保守结构域缺失对酿酒酵母二酰胺耐受性的影响 | 第54-56页 |
第五章 结论 | 第56-58页 |
参考文献 | 第58-68页 |
致谢 | 第68-70页 |
攻读硕士学位期间的研究成果 | 第70-71页 |