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Elp3经Yap1参与酿酒酵母氧化应激的分子机制研究

摘要第4-6页
ABSTRACT第6-8页
第一章 引言第12-26页
    1.1 Elp3相关研究进展第12-16页
        1.1.1 Elongator复合物的发现及结构第12-13页
        1.1.2 Elp3的功能第13-16页
    1.2 ROS的产生与氧化应激第16-17页
        1.2.1 ROS的产生第16-17页
        1.2.2 氧化应激第17页
    1.3 酿酒酵母中的氧化应激体系第17-21页
        1.3.1 参与酿酒酵母氧化应激的主要转录因子第17-19页
        1.3.2 酿酒酵母中氧化应激的主要通路第19页
        1.3.3 参与酿酒酵母氧化应激的其他组分第19-21页
    1.4 参与酿酒酵母氧化应激的两个氧化还原系统第21-22页
        1.4.1 酿酒酵母中TRX和GSH系统的细胞分布及作用机制第21页
        1.4.2 酿酒酵母中细胞质的巯基氧化还原控制第21-22页
        1.4.3 酿酒酵母中线粒体的巯基氧化还原控制第22页
    1.5 氧化应激与热激之间的相互作用第22-24页
        1.5.1 酿酒酵母的热激应答反应第22-23页
        1.5.2 酿酒酵母氧化应激与热激之间的相互作用第23-24页
    1.6 研究目的及意义第24-26页
第二章 材料和方法第26-34页
    2.1 实验材料第26-29页
        2.1.1 菌株和质粒第26页
        2.1.2 引物设计第26-27页
        2.1.3 试剂和培养基第27-29页
        2.1.4 实验试剂盒第29页
        2.1.5 主要仪器设备第29页
    2.2 试验方法第29-34页
        2.2.1 DH5α感受态的制备以及质粒的转化第29页
        2.2.2 质粒的提取第29页
        2.2.3 酵母的高效转化第29页
        2.2.4 敏感性检测第29-30页
        2.2.5 生长曲线的绘制第30页
        2.2.6 酵母总蛋白的提取第30-31页
        2.2.7 GPX酶活测定第31页
        2.2.8 westernblot第31页
        2.2.9 RNA的提取第31页
        2.2.10 基因表达分析第31-32页
        2.2.11 Yap1的核定位检测第32页
        2.2.12 Yap1活性的检测第32-33页
        2.2.13 MDA的测定第33页
        2.2.14 ROS的检测第33-34页
第三章 结果与分析第34-50页
    3.1 Elp3缺失对Yap1核定位及活性的影响第34-37页
        3.1.1 Elp3缺失对Yap1核定位的影响第34-35页
        3.1.2 Elp3缺失对酵母中转录因子Yap1活性的影响第35页
        3.1.3 Elp3缺失对Yap1靶基因表达的影响第35-37页
    3.2 Elp3缺失对SOD和Hsp75、Hsp105表达的影响第37-40页
        3.2.1 Elp3缺失对SOD基因及蛋白表达的影响第37-39页
        3.2.2 Elp3缺失对Hsp75、Hsp105蛋白表达的影响第39-40页
    3.3 Elp3缺失对胞内蛋白含量及GPX酶活影响第40-41页
    3.4 Elp3缺失对酵母细胞内ROS和MDA的影响第41-43页
        3.4.1 Elp3缺失对酵母细胞内ROS的影响第41-42页
        3.4.2 Elp3缺失对酵母细胞内MDA的影响第42-43页
    3.5 Elp3缺失对二酰胺的敏感性实验和生长曲线的绘制第43-50页
        3.5.1 elp3△菌株的敏感性实验第43-44页
        3.5.2 氧化剂和高温胁迫elp3△菌株的生长曲线第44-45页
        3.5.3 elp3△菌株的功能补偿实验第45-47页
        3.5.4 elp3△菌株功能补偿菌株的生长曲线第47-50页
第四章 讨论第50-56页
    4.1 Elp3确实参与Yap1的核定位及其活性调控第50-51页
    4.2 Elp3亚基缺失影响酿酒酵母中SOD、HSP蛋白表达量第51-53页
    4.3 Elp3亚基缺失对酿酒酵母ROS等生理指标的影响第53-54页
    4.4 Elp3及其两保守结构域缺失对酿酒酵母二酰胺耐受性的影响第54-56页
第五章 结论第56-58页
参考文献第58-68页
致谢第68-70页
攻读硕士学位期间的研究成果第70-71页

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