| 摘要 | 第5-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第12-21页 |
| 1.1 Gd X基因和p15RS基因概述 | 第12-15页 |
| 1.1.1 Gd X基因简介 | 第12页 |
| 1.1.2 Gd X在蛋白质加工过程中的作用 | 第12页 |
| 1.1.3 Gd X与人类疾病的关系 | 第12-13页 |
| 1.1.4 p15RS基因简介 | 第13页 |
| 1.1.5 p15RS基因的作用 | 第13-14页 |
| 1.1.6 p15RS基因参与Wnt/β-catenin信号通路调控 | 第14-15页 |
| 1.2 单克隆抗体 | 第15-17页 |
| 1.2.1 单克隆抗体的制备原理 | 第15-16页 |
| 1.2.2 单克隆抗体的研究现状及发展 | 第16-17页 |
| 1.2.3 单克隆抗体的应用 | 第17页 |
| 1.3 Gd X和p15RS单克隆抗体的研究现状 | 第17-18页 |
| 1.4 本研究的技术路线 | 第18-19页 |
| 1.5 本文选题思路及主要研究内容 | 第19-21页 |
| 第2章 Gd X和p15RS的真核表达 | 第21-40页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料与设备 | 第21-27页 |
| 2.2.1 菌种和载体 | 第21-22页 |
| 2.2.3 试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.4 实验试剂配制方法 | 第23-26页 |
| 2.2.5 主要仪器与设备 | 第26-27页 |
| 2.3 重组质粒的扩增及鉴定 | 第27-31页 |
| 2.3.1 大肠杆菌的活化 | 第27页 |
| 2.3.2 CaCl_2转化法制备感受态细胞 | 第27页 |
| 2.3.3 质粒的转化和扩增 | 第27-28页 |
| 2.3.4 重组质粒的筛选及制备 | 第28-29页 |
| 2.3.5 质粒的酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 2.3.6 琼脂糖凝胶电泳 | 第30页 |
| 2.3.7 重组质粒的测序分析 | 第30-31页 |
| 2.3.8 质粒浓度的测定 | 第31页 |
| 2.4 分泌蛋白的表达 | 第31-34页 |
| 2.4.1 HEK293T细胞的培养 | 第31-32页 |
| 2.4.2 Lipofecter脂质体法瞬时转染HEK293T细胞 | 第32-33页 |
| 2.4.3 稳定细胞株的建立 | 第33-34页 |
| 2.4.4 细胞增殖能力测定（MTT法）测定 | 第34页 |
| 2.5 分泌蛋白的鉴定 | 第34-39页 |
| 2.5.1 GdX和p15RS表达蛋白浓度的浓缩 | 第34页 |
| 2.5.2 非变性SDS-PAGE电泳分离蛋白 | 第34-37页 |
| 2.5.3 Western-blot检测GdX和p15RS蛋白表达 | 第37-38页 |
| 2.5.4 GdX和p15RS表达蛋白的纯化 | 第38页 |
| 2.5.5 GdX和p15RS纯化蛋白的浓缩 | 第38-39页 |
| 2.6 数据处理 | 第39页 |
| 2.7 本章小结 | 第39-40页 |
| 第3章 抗GdX和p15RS蛋白的单克隆抗体的制备及鉴定 | 第40-53页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第40-43页 |
| 3.2.1 细胞株和实验动物 | 第40页 |
| 3.2.2 试剂 | 第40页 |
| 3.2.3 实验试剂配制方法 | 第40-42页 |
| 3.2.5 主要仪器与设备 | 第42-43页 |
| 3.3 动物免疫 | 第43-46页 |
| 3.3.1 免疫动物的饲养 | 第43页 |
| 3.3.2 DNA和蛋白质免疫原的选择 | 第43页 |
| 3.3.3 接种部位的选择及预处理 | 第43-44页 |
| 3.3.4 免疫动物 | 第44-45页 |
| 3.3.5 间接ELISA法检测血清效价 | 第45-46页 |
| 3.4 杂交瘤细胞的制备 | 第46-48页 |
| 3.4.1 脾细胞的制备 | 第46-47页 |
| 3.4.2 骨髓瘤细胞的制备 | 第47页 |
| 3.4.3 巨噬细胞的制备 | 第47页 |
| 3.4.4 杂交瘤细胞的制备 | 第47-48页 |
| 3.5 杂交瘤细胞培养 | 第48-49页 |
| 3.5.1 杂交瘤细胞的选择性培养 | 第48页 |
| 3.5.2 阳性杂交瘤克隆化和建系 | 第48-49页 |
| 3.5.3 杂交瘤细胞的扩大培养 | 第49页 |
| 3.5.4 杂交瘤细胞的冻存 | 第49页 |
| 3.6 单克隆抗体的制备 | 第49-50页 |
| 3.7 腹水型单抗的纯化 | 第50页 |
| 3.8 单克隆抗体的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.8.1 单克隆抗体的特异性鉴定 | 第50-51页 |
| 3.8.2 单克隆抗体的纯度检测 | 第51页 |
| 3.8.3 单克隆抗相对亲和常数AFC测定 | 第51页 |
| 3.9 数据处理 | 第51页 |
| 3.10 本章小结 | 第51-53页 |
| 第4章 实验结果分析与讨论 | 第53-71页 |
| 4.1 GdX和p15RS基因扩增 | 第53-54页 |
| 4.1.1 目的基因的扩增 | 第53页 |
| 4.1.2 重组质粒的酶切鉴定 | 第53-54页 |
| 4.1.3 质粒浓度测定 | 第54页 |
| 4.2 GdX和p15RS分泌蛋白的表达及鉴定 | 第54-64页 |
| 4.2.1 HEK293T细胞生长状况 | 第54-56页 |
| 4.2.2 细胞计数 | 第56页 |
| 4.2.3 重组质粒在HEK293T细胞中的表达 | 第56-60页 |
| 4.2.4 重组蛋白的SDS-PAGE | 第60-62页 |
| 4.2.5 重组蛋白的Western检测 | 第62页 |
| 4.2.6 凝胶过滤纯化表达蛋白 | 第62-64页 |
| 4.3 抗GdX和p15RS蛋白的单克隆抗体的制备及性能分析 | 第64-69页 |
| 4.3.1 免疫小鼠血清效价的测定 | 第64页 |
| 4.3.2 细胞融合 | 第64-66页 |
| 4.3.3 杂交瘤细胞株的建立 | 第66-67页 |
| 4.3.4 小鼠腹水效价的测定 | 第67页 |
| 4.3.5 单克隆抗体的鉴定 | 第67-69页 |
| 4.5 讨论 | 第69-71页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 参考文献 | 第72-77页 |
| 附录 | 第77-79页 |
| 攻读硕士学位期间承担的科研任务与主要成果 | 第79-80页 |
| 致谢 | 第80-81页 |
| 作者简介 | 第81页 |
