| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 第1章 绪论 | 第12-16页 |
| 1.1 谷氨酰胺代谢在非小细胞肺癌发生发展中的作用 | 第12-13页 |
| 1.2 谷氨酰胺酶调控的研究现状 | 第13-14页 |
| 1.3 PKCε在肿瘤中的研究进展 | 第14-16页 |
| 第2章 抑制谷氨酰胺代谢影响非小细胞肺癌细胞的增殖 | 第16-27页 |
| 2.1 引言 | 第16页 |
| 2.2 实验材料 | 第16-19页 |
| 2.2.1 实验仪器 | 第16-17页 |
| 2.2.2 实验试剂与实验耗材 | 第17-19页 |
| 2.3 实验方法 | 第19-23页 |
| 2.3.1 细胞培养(以10cm培养皿为例) | 第19页 |
| 2.3.2 细胞增殖实验 | 第19-20页 |
| 2.3.3 siRNA转染(以六孔板为例) | 第20页 |
| 2.3.4 蛋白免疫印迹实验(WesternBlot) | 第20-22页 |
| 2.3.5 荧光定量PCR | 第22-23页 |
| 2.3.6 统计分析 | 第23页 |
| 2.4 实验结果 | 第23-25页 |
| 2.4.1 非小细胞肺癌细胞的增殖依赖谷氨酰胺 | 第23-24页 |
| 2.4.2 抑制谷氨酰胺酶的功能影响非小细胞肺癌细胞的增殖 | 第24-25页 |
| 2.5 讨论 | 第25-27页 |
| 第3章 谷氨酰胺酶活性在非小细胞肺癌中显著上调且受磷酸化修饰调控 | 第27-45页 |
| 3.1 引言 | 第27-28页 |
| 3.2 实验材料 | 第28-31页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第28-29页 |
| 3.2.2 实验试剂与实验耗材 | 第29-31页 |
| 3.3 实验方法 | 第31-38页 |
| 3.3.1 细胞培养 | 第31页 |
| 3.3.2 质粒转染(以10cm培养皿为例) | 第31页 |
| 3.3.3 蛋白质免疫共沉淀 | 第31-32页 |
| 3.3.4 蛋白免疫印迹实验 | 第32页 |
| 3.3.5 谷氨酰胺酶活性测定 | 第32-33页 |
| 3.3.6 等电聚焦实验 | 第33-35页 |
| 3.3.7 GAC点突变 | 第35-38页 |
| 3.3.8 统计分析 | 第38页 |
| 3.4 实验结果 | 第38-44页 |
| 3.4.1 谷氨酰胺酶活性在非小细胞肺癌中显著增强 | 第38-39页 |
| 3.4.2 谷氨酰胺酶活性受磷酸化调控 | 第39-40页 |
| 3.4.3 GAC第314位丝氨酸是非小细胞肺癌中调控谷氨酰胺酶活性的关键磷酸化位点 | 第40-43页 |
| 3.4.4 谷氨酰胺酶的磷酸化调控广泛存在于各类癌细胞中 | 第43-44页 |
| 3.5 讨论 | 第44-45页 |
| 第4章 PKCε调控谷氨酰胺酶第314位丝氨酸的磷酸化进而影响酶的活性 | 第45-56页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 实验材料 | 第45-49页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第45-46页 |
| 4.2.2 实验试剂与实验耗材 | 第46-49页 |
| 4.3 实验方法 | 第49-51页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第49页 |
| 4.3.2 质粒转染 | 第49页 |
| 4.3.3 siRNA转染 | 第49页 |
| 4.3.4 蛋白免疫印迹实验 | 第49页 |
| 4.3.5 谷氨酰胺酶活性测定 | 第49页 |
| 4.3.6 蛋白质免疫共沉淀实验 | 第49页 |
| 4.3.7 荧光定量PCR | 第49页 |
| 4.3.8 体外磷酸化实验 | 第49-50页 |
| 4.3.9 统计分析 | 第50-51页 |
| 4.4 实验结果 | 第51-54页 |
| 4.4.1 抑制蛋白激酶C(PKC)影响谷氨酰胺酶活性 | 第51-52页 |
| 4.4.2 蛋白激酶C对谷氨酰胺酶活性的调控广泛存在于各种癌症中 | 第52-53页 |
| 4.4.3 PKCε调控谷氨酰胺酶的磷酸化及其酶活性 | 第53-54页 |
| 4.5 讨论 | 第54-56页 |
| 第5章 NF-κB-PKCε信号轴调控谷氨酰胺代谢 | 第56-73页 |
| 5.1 引言 | 第56页 |
| 5.2 实验材料 | 第56-60页 |
| 5.2.1 实验仪器 | 第56-57页 |
| 5.2.2 实验试剂与实验耗材 | 第57-60页 |
| 5.3 实验方法 | 第60-67页 |
| 5.3.1 细胞培养 | 第60页 |
| 5.3.2 等电聚焦实验 | 第60页 |
| 5.3.3 蛋白免疫印迹实验 | 第60页 |
| 5.3.4 谷氨酰胺酶活性测定 | 第60页 |
| 5.3.5 质粒转染 | 第60页 |
| 5.3.6 siRNA转染 | 第60页 |
| 5.3.7 蛋白质免疫共沉淀实验 | 第60页 |
| 5.3.8 荧光定量PCR | 第60页 |
| 5.3.9 染色质免疫共沉淀实验 | 第60-63页 |
| 5.3.10 凝胶迁移实验(EMSA) | 第63-64页 |
| 5.3.11 荧光素酶报告基因实验 | 第64-66页 |
| 5.3.12 统计分析 | 第66-67页 |
| 5.4 实验结果 | 第67-72页 |
| 5.4.1 NF-κB(p65)调控谷氨酰胺酶的磷酸化及其酶活性 | 第67-68页 |
| 5.4.2 NF-κB(p65)通过转录调控PKCε的表达来调节谷氨酰胺酶活性 | 第68-70页 |
| 5.4.3 NF-κB-PKCε信号轴对非小细胞肺癌细胞的增殖至关重要 | 第70-72页 |
| 5.5 讨论 | 第72-73页 |
| 第6章 抑制谷氨酰胺酶第314位丝氨酸的磷酸化降低非小细胞肺癌细胞的恶性程度 | 第73-89页 |
| 6.1 引言 | 第73页 |
| 6.2 实验材料 | 第73-75页 |
| 6.2.1 实验仪器 | 第73-74页 |
| 6.2.2 实验试剂与实验耗材 | 第74-75页 |
| 6.3 实验方法 | 第75-81页 |
| 6.3.1 细胞培养 | 第75页 |
| 6.3.2 细胞增殖实验 | 第75-76页 |
| 6.3.3 裸鼠皮下成瘤实验 | 第76页 |
| 6.3.4 HE染色 | 第76-77页 |
| 6.3.5 免疫组化染色 | 第77-78页 |
| 6.3.6 基因芯片分析 | 第78页 |
| 6.3.7 ATP含量测定 | 第78页 |
| 6.3.8 乳酸含量测定 | 第78-79页 |
| 6.3.9 谷氨酰胺含量测定 | 第79页 |
| 6.3.10 谷氨酸含量测定 | 第79-80页 |
| 6.3.11 代谢组学分析 | 第80页 |
| 6.3.12 荧光定量PCR实验 | 第80页 |
| 6.3.13 统计分析 | 第80-81页 |
| 6.4 实验结果 | 第81-88页 |
| 6.4.1 抑制谷氨酰胺酶第314位丝氨酸的磷酸化降低非小细胞肺癌细胞的恶性程度 | 第81-83页 |
| 6.4.2 抑制谷氨酰胺酶第314位丝氨酸的磷酸化引起非小细胞肺癌细胞代谢的重编程 | 第83-85页 |
| 6.4.3 抑制谷氨酰胺酶第314位丝氨酸的磷酸化引起非小细胞肺癌细胞基因表达的重编程 | 第85-88页 |
| 6.5 讨论 | 第88-89页 |
| 第7章 谷氨酰胺酶的磷酸化水平在非小细胞肺癌诊疗中的临床意义 | 第89-92页 |
| 7.1 引言 | 第89页 |
| 7.2 实验材料 | 第89页 |
| 7.2.1 实验材料 | 第89页 |
| 7.3 实验方法 | 第89-90页 |
| 7.3.1 免疫组化染色 | 第89页 |
| 7.3.2 统计分析 | 第89-90页 |
| 7.4 实验结果 | 第90-91页 |
| 7.4.1 谷氨酰胺酶的磷酸化水平在非小细胞肺癌组织中显著上调且与病人生存率密切相关 | 第90-91页 |
| 7.5 讨论 | 第91-92页 |
| 第8章 主要结论、创新点与展望 | 第92-94页 |
| 8.1 主要结论 | 第92页 |
| 8.2 创新点 | 第92页 |
| 8.3 展望 | 第92-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 参考文献 | 第95-100页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第100-101页 |
| 综述 | 第101-112页 |
| 参考文献 | 第107-112页 |
