| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4-5页 |
| 第1章 引言 | 第9-19页 |
| 1.1 神经干细胞 | 第9-11页 |
| 1.1.1 神经干细胞概述 | 第9页 |
| 1.1.2 神经干细胞龛和神经发生 | 第9-11页 |
| 1.2 单细胞转录组测序技术 | 第11-15页 |
| 1.2.1 单细胞的捕获 | 第11-12页 |
| 1.2.2 单细胞全转录组扩增 | 第12-15页 |
| 1.3 单细胞转录组测序在神经系统研究中的应用 | 第15-17页 |
| 1.3.1 探究神经细胞的分子分类 | 第15-16页 |
| 1.3.2 揭示神经性疾病的相关机制 | 第16-17页 |
| 1.4 课题研究目的和意义 | 第17-19页 |
| 第2章 实验材料 | 第19-24页 |
| 2.1 实验设备 | 第19-20页 |
| 2.2 试剂耗材 | 第20-22页 |
| 2.3 实验引物信息 | 第22-23页 |
| 2.4 实验动物 | 第23-24页 |
| 第3章 实验方法 | 第24-39页 |
| 3.1 实验小鼠基因型鉴定 | 第24-25页 |
| 3.1.1 主要试剂 | 第24页 |
| 3.1.2 操作步骤 | 第24-25页 |
| 3.2 小鼠Tamoxifen注射 | 第25-26页 |
| 3.2.1 主要试剂 | 第25页 |
| 3.2.2 配制Tamoxifen溶液(10mg/ml) | 第25-26页 |
| 3.2.3 转基因小鼠注射Tamoxifen溶液 | 第26页 |
| 3.3 原代小鼠神经细胞单细胞消化 | 第26-28页 |
| 3.3.1 主要试剂 | 第26页 |
| 3.3.2 操作步骤 | 第26-28页 |
| 3.4 SMART-seq2单细胞全长转录本扩增 | 第28-32页 |
| 3.4.1 主要试剂 | 第28-29页 |
| 3.4.2 操作步骤 | 第29-32页 |
| 3.5 实时荧光定量PCR初步检测文库质量 | 第32页 |
| 3.5.1 主要试剂 | 第32页 |
| 3.5.2 操作步骤 | 第32页 |
| 3.6 Angilent 2100 Bioanalyser检测cDNA文库质量 | 第32-33页 |
| 3.6.1 主要试剂 | 第32页 |
| 3.6.2 操作步骤 | 第32-33页 |
| 3.7 Qbit 3.0 cDNA文库定量 | 第33-34页 |
| 3.7.1 主要试剂 | 第33页 |
| 3.7.2 操作步骤 | 第33-34页 |
| 3.8 cDNA Illumina测序文库构建 | 第34-36页 |
| 3.8.1 1ng起始DNA片段化 | 第34-35页 |
| 3.8.2 磁珠分选特定长度产物 | 第35-36页 |
| 3.9 琼脂糖凝胶电泳检测文库分布 | 第36-37页 |
| 3.9.1 主要试剂 | 第36页 |
| 3.9.2 操作步骤 | 第36-37页 |
| 3.10 .生物信息学分析 | 第37-39页 |
| 3.10.1 基因丰度估计和筛选 | 第37页 |
| 3.10.2 样本类型划分 | 第37页 |
| 3.10.3 主成分分析 | 第37-38页 |
| 3.10.4 加权基因共表达网络分析 | 第38-39页 |
| 第4章 实验结果 | 第39-62页 |
| 4.1 小鼠基因型鉴定结果 | 第39-40页 |
| 4.1.1 Rosa26-CAG-LSL-ZsGreen小鼠的基因型鉴定 | 第39页 |
| 4.1.2 CD133-Cre-ERT2小鼠基因型鉴定 | 第39-40页 |
| 4.2 ZsGreen+细胞的流式分选 | 第40-41页 |
| 4.3 样本与磁珠体积比例的确定 | 第41-42页 |
| 4.4 dNTP用量和M-MLV反转录酶的确定 | 第42-44页 |
| 4.5 qPCR初步检测单细胞cDNA文库的质量 | 第44-45页 |
| 4.6 cDNA的质量控制结果 | 第45-47页 |
| 4.7 cDNA文库的定量 | 第47页 |
| 4.8 Illumina二代测序文库的构建和质控 | 第47-49页 |
| 4.9 测序数据的生物信息分析 | 第49-62页 |
| 4.9.1 无监督聚类分析 | 第49-50页 |
| 4.9.2 主成分分析(Principal component analysis,PCA) | 第50-51页 |
| 4.9.3 加权基因共表达网络分析(Weighted Gene Co-expression Network Analyses,WGCNA) | 第51-57页 |
| 4.9.4 GO基因功能富集分析和KEGG通路分析 | 第57-62页 |
| 第5章 结论与讨论 | 第62-64页 |
| 5.1 结论 | 第62页 |
| 5.2 讨论 | 第62-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-69页 |
