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幽门螺杆菌分离株基因组多态性和抗生素耐药性的研究

中文摘要第4-6页
Abstract第6-7页
英文缩写词表第12-13页
第1章 绪论第13-20页
    1.1 幽门螺杆菌感染与相关疾病的流行病学研究现状第13-14页
    1.2 幽门螺杆菌基因多态性以及毒力基因的研究概括第14-16页
    1.3 幽门螺杆菌抗生素耐药与耐药机制的研究进展第16-20页
第2章 随机扩增多态性DNA(RAPD)方法对幽门螺杆菌基因组多态性的研究第20-32页
    2.1 材料与方法第20-26页
        2.1.1 研究对象第20页
        2.1.2 试剂与仪器第20-22页
            2.1.2.1 主要试剂第20-21页
            2.1.2.2 主要仪器第21-22页
        2.1.3 主要培养基的制备第22-23页
            2.1.3.1 布氏肉汤转运培养基第22页
            2.1.3.2 Karmali培养基第22页
            2.1.3.3 50 ×TAE第22页
            2.1.3.4 2%琼脂糖凝胶第22-23页
        2.1.4 胃黏膜组织的采集与培养第23页
            2.1.4.1 标本取材第23页
            2.1.4.2 分离培养第23页
            2.1.4.3 纯培养第23页
        2.1.5 H.pylori菌株生物学鉴定方法第23-24页
            2.1.5.1 革兰氏染色镜检第23-24页
            2.1.5.2 快速尿素酶实验第24页
            2.1.5.3 氧化酶实验第24页
            2.1.5.4 触酶实验第24页
        2.1.6 尿素酶A(ureA)基因和16SrRNA基因的检测鉴定第24-25页
        2.1.7 RAPD随机引物序列第25页
        2.1.8 RAPD随机引物的反应体系第25页
        2.1.9 RAPD随机引物的循环参数第25页
        2.1.10 凝胶电泳检测目的条带第25-26页
        2.1.11 统计学处理第26页
    2.2 结果第26-30页
        2.2.1 H.pylori生物学鉴定结果第26页
        2.2.2 H.pylori基因鉴定结果第26-28页
            2.2.2.1 尿素酶A(ureA)基因检测第26-27页
            2.2.2.2 PCR扩增16SrRNA基因检测第27-28页
        2.2.3 H.pylori病理诊断结果第28页
        2.2.4 RAPD随机引物的检测第28-30页
            2.2.4.1 RAPD稳定性及重复性实验第28-29页
            2.2.4.2 RAPD扩增随机引物的基因图谱第29页
            2.2.4.3 RAPD基因型与临床疾病的关系第29-30页
    2.3 讨论第30-32页
第3章 幽门螺杆菌对常用抗生素耐药性的测定第32-39页
    3.1 材料和方法第32-34页
        3.1.1 主要实验用品及抗生素第32页
        3.1.2 测定H.pylori对七种抗生素的MIC第32-34页
            3.1.2.1 抗生素溶液配制第32页
            3.1.2.2 含抗生素的哥伦比亚血琼脂培养基的配制第32-33页
            3.1.2.3 接种菌液的制备第33页
            3.1.2.4 接种H.pylori细菌第33页
            3.1.2.5 H.pylori对抗生素MIC结果的判定第33-34页
    3.2 结果第34-37页
        3.2.1 H.pylori对七种抗生素的耐药率第34-35页
        3.2.2 H.pylori对七种抗生素的药敏实验结果第35-36页
        3.2.3 多重耐药的H.pylori菌株第36-37页
    3.3 讨论第37-39页
第4章 幽门螺杆菌抗生素的耐药性与毒力基因的相关性的研究第39-48页
    4.1 材料和方法第39-41页
        4.1.1 主要实验用品及抗生素第39页
        4.1.2 PCR扩增cagA、vacA、iceA基因及其亚型第39-41页
            4.1.2.1 各基因引物序列及扩增产物长度第39-40页
            4.1.2.2 cagA、vacA、iceA基因PCR反应体系第40页
            4.1.2.3 PCR反应的循环参数第40页
            4.1.2.4 PCR反应凝胶电泳检测第40-41页
        4.1.3 统计学分析第41页
    4.2 结果第41-46页
        4.2.1 H.pylori毒力基因cagA、vacA、iceA的检出结果第41-42页
        4.2.2 H.pylori耐药性与毒力基因的关系第42-46页
            4.2.2.1 cagA基因与抗生素耐药性之间的相关性第42-43页
            4.2.2.2 vacA基因s区各亚型与抗生素耐药性之间的关系第43-44页
            4.2.2.3 vacA基因m区各亚型与抗生素耐药性之间的关系第44-45页
            4.2.2.4 vacA基因i区各亚型与抗生素耐药性之间的关系第45页
            4.2.2.5 iceA基因各亚型与抗生素耐药性之间的关系第45-46页
    4.3 讨论第46-48页
第5章 幽门螺杆菌对克拉霉素的耐药机制分析第48-57页
    5.1 材料与方法第48-49页
        5.1.1 琼脂稀释法第48页
        5.1.2 复苏克拉霉素耐药菌株第48页
        5.1.3 PCR扩增23SrRNA目的基因第48-49页
            5.1.3.1 扩增目的片段第48页
            5.1.3.2 PCR反应体系第48-49页
            5.1.3.3 PCR的循环参数第49页
            5.1.3.4 凝胶电泳检测目的条带第49页
            5.1.3.5 PCR扩增产物测序第49页
        5.1.4 测序序列分析第49页
    5.2 结果第49-56页
        5.2.1 PCR扩增23SrRNA目的基因的检测第49-50页
        5.2.2 突变位点测序图谱第50-53页
        5.2.3 突变位点用ClustalW比对分析第53-55页
        5.2.4 23 SrRNA突变位点分析第55-56页
    5.3 讨论第56-57页
第6章 结论第57-58页
参考文献第58-66页
作者简介及在学期间所取得的科研成果第66-67页
致谢第67-68页
附录第68-73页

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