| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第1章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 人类免疫缺陷病毒(HIV)及艾滋病简介 | 第11-16页 |
| 1.1.1 艾滋病的流行是全球公共卫生事业的巨大挑战 | 第11-12页 |
| 1.1.2 HIV的起源与进化 | 第12-13页 |
| 1.1.3 HIV/SIV的形态结构与基因组组成 | 第13-14页 |
| 1.1.4 HIV感染机体和艾滋病的进展过程 | 第14-16页 |
| 1.2 黏膜免疫疫苗的开发与HIV的预防与控制 | 第16-21页 |
| 1.2.1 黏膜是HIV病毒感染的主要门户 | 第16-17页 |
| 1.2.2 HIV通过黏膜侵入机体 | 第17-18页 |
| 1.2.3 HIV入侵黏膜系统的危害 | 第18-19页 |
| 1.2.4 艾滋病疫苗的研发现状 | 第19-20页 |
| 1.2.5 本课题的工作-新型艾滋病疫苗控制SIV病毒感染恒河猴的保护机制探索 | 第20-21页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第21-41页 |
| 2.1 痘病毒载体与腺病毒载体联合免疫 | 第21-22页 |
| 2.1.1 实验试剂及材料 | 第21页 |
| 2.1.2 恒河猴免疫的实验方法 | 第21-22页 |
| 2.2 实时定量PCR检测血浆中SIV病毒载量 | 第22-25页 |
| 2.2.1 实验试剂及材料 | 第22-23页 |
| 2.2.2 分离猴血浆 | 第23页 |
| 2.2.3 SIV血浆病毒基因组的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.4 RNA标准品的制备 | 第24页 |
| 2.2.5 实时定量PCR检测血浆中SIV病毒载量 | 第24-25页 |
| 2.3 酶联免疫斑点技术(ELISPOT)检测IFN-Γ因子的水平 | 第25-29页 |
| 2.3.1 实验材料及试剂 | 第25-26页 |
| 2.3.2 R10完全培养基的配置 | 第26页 |
| 2.3.3 SIV多肽的溶解保存 | 第26页 |
| 2.3.4 恒河猴血浆PBMC(Peripheral blood mononuclear cell)的分离和计数 | 第26-27页 |
| 2.3.5 恒河猴淋巴结淋巴细胞的制备 | 第27页 |
| 2.3.6 恒河猴血浆PBMC冻存 | 第27页 |
| 2.3.7 ELISPOT检测IFN-γ分泌操作步骤 | 第27-29页 |
| 2.3.8 ELISPOT结果分析方法 | 第29页 |
| 2.4 流式分析细胞表型 | 第29-30页 |
| 2.4.1 实验材料与试剂 | 第29页 |
| 2.4.2 流式分析细胞表型操作步骤 | 第29-30页 |
| 2.5 酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中SIV特异性的结合抗体 | 第30-32页 |
| 2.5.1 实验材料及试剂 | 第30页 |
| 2.5.2 SIVmac239病毒的扩增 | 第30页 |
| 2.5.3 超速离心的方法纯化浓缩SIVmac239 | 第30-31页 |
| 2.5.4 制备SIVmac239全病毒裂解液 | 第31页 |
| 2.5.5 ELISA检测血浆中SIV特异性的结合抗体的操作 | 第31-32页 |
| 2.6 胞内细胞因子染色法检测多功能T细胞 | 第32-33页 |
| 2.6.1 实验仪器及材料 | 第32页 |
| 2.6.2 所需试剂的配制 | 第32页 |
| 2.6.3 胞内细胞因子染色操作步骤 | 第32-33页 |
| 2.7 Luminex检测猴血清中细胞因子的表达 | 第33-34页 |
| 2.7.1 实验材料及试剂 | 第33-34页 |
| 2.7.2 Luminex操作步骤 | 第34页 |
| 2.8 石蜡包埋和HE染色(hematoxylin-eosin staining) | 第34-35页 |
| 2.8.1 实验材料及试剂 | 第34页 |
| 2.8.2 石蜡包埋和HE染色操作 | 第34-35页 |
| 2.9 免疫组化 | 第35-37页 |
| 2.9.1 实验材料及试剂 | 第35-36页 |
| 2.9.2 免疫组化操作方法 | 第36-37页 |
| 2.9.4 免疫组化注意事项 | 第37页 |
| 2.10 组织中SIV整合基因的定量 | 第37-41页 |
| 2.10.1 实验材料及试剂 | 第37-38页 |
| 2.10.2 组织基因组提取 | 第38-39页 |
| 2.10.3 DNA标准品的制备 | 第39页 |
| 2.10.4 Q-PCR定量组织中SIV DNA病毒载量 | 第39-41页 |
| 第3章 结果与分析 | 第41-65页 |
| 3.1 我们的疫苗策略能够预防SIV的感染 | 第41-43页 |
| 3.2 该疫苗产生的免疫应答降低了恒河猴体内的血浆病毒载量 | 第43-45页 |
| 3.3 血液指标初步证明该疫苗能够控制肠道CD4+T细胞的丢失 | 第45-47页 |
| 3.4 猴肠道组织及其相关淋巴结结构观察 | 第47-60页 |
| 3.4.1 本文部分试验猴猴发病症状观察记录 | 第47页 |
| 3.4.2 该疫苗能够减缓淋巴结的结构破坏 | 第47-51页 |
| 3.4.3 该疫苗能够维持淋巴结中B细胞的正常分布 | 第51-53页 |
| 3.4.4 该疫苗能够控制猕猴淋巴结中T细胞的丢失 | 第53-55页 |
| 3.4.5 该疫苗能有效促进和维持淋巴滤泡内细胞增殖 | 第55-57页 |
| 3.4.6 死于艾滋病的猕猴肠道结构变化的观察 | 第57-60页 |
| 3.5 该疫苗可以降低SIV病毒储存库 | 第60-63页 |
| 3.6 实验结果总结 | 第63-65页 |
| 第4章 问题与讨论 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 附录1 缩略词 | 第75页 |
| 附录2 申明 | 第75页 |
| 附录3 伦理申明 | 第75-77页 |
| 致谢 | 第77-79页 |
| 在学期间已发表或取得的其他取得的其他研究成果 | 第79页 |
