| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 前言 | 第11-21页 |
| 1 超氧化物歧化酶的研究 | 第11-12页 |
| 2 人参铜锌超氧化物歧化酶研究 | 第12-13页 |
| 3 生物体内的氧化及抗氧化 | 第13-14页 |
| 3.1 自由基、活性氧 | 第13-14页 |
| 3.2 非酶类抗氧化分子简介 | 第14页 |
| 4 超氧化物歧化酶的作用机制 | 第14页 |
| 5 超氧化物歧化酶的应用 | 第14-16页 |
| 5.1 抗肿瘤和抗辐射 | 第14-15页 |
| 5.2 防治心脑血管疾病 | 第15页 |
| 5.3 作为某些疾病的检测指标 | 第15页 |
| 5.4 具有抗炎症作用 | 第15页 |
| 5.5 用于动物保健 | 第15-16页 |
| 6 蛋白质浓度的测定方法 | 第16-17页 |
| 6.1 双缩脲法 | 第16页 |
| 6.2 考马斯亮蓝法 | 第16页 |
| 6.3 紫外分光光度法 | 第16页 |
| 6.4 BCA法 | 第16-17页 |
| 7 超氧化物歧化酶的活性测定 | 第17页 |
| 8 超氧化物歧化酶吸收机制 | 第17-18页 |
| 9 SOD的获得途径 | 第18-19页 |
| 9.1 植物SOD的提取 | 第18-19页 |
| 9.2 动物SOD的提取 | 第19页 |
| 9.3 利用基因手段获得高纯度SOD | 第19页 |
| 10 研究目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 人和人参Cu/Zn-SOD基因表达载体的构建 | 第21-36页 |
| 1 材料 | 第21-23页 |
| 1.1 工具酶和其它指示剂 | 第21页 |
| 1.2 主要溶液的配制 | 第21-22页 |
| 1.3 培养基 | 第22页 |
| 1.4 主要使用仪器 | 第22-23页 |
| 2 方法 | 第23-28页 |
| 2.1 SWISS同源建模 | 第23页 |
| 2.2 总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.3 CDNA的合成 | 第24页 |
| 2.4 引物的设计与合成 | 第24-25页 |
| 2.5 目的基因的克隆 | 第25页 |
| 2.6 1%琼脂糖凝胶电泳 | 第25页 |
| 2.7 PCR产物的回收纯化 | 第25-26页 |
| 2.8 目的基因的酶切、连接、转化 | 第26-27页 |
| 2.8.1 载体和基因的酶切 | 第26页 |
| 2.8.2 T4酶连接 | 第26-27页 |
| 2.8.3 连接产物的转化入DH5a | 第27页 |
| 2.9 重组载体正确性鉴定 | 第27-28页 |
| 2.9.1 重组质粒提取 | 第27-28页 |
| 2.9.2 质粒PCR鉴定和双酶切鉴定 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-34页 |
| 3.1 SWISS-MODEL同源建模分析 | 第28-31页 |
| 3.2 基因扩增PCR结果 | 第31-32页 |
| 3.3 两种酶构建载体正确性验证 | 第32-33页 |
| 3.4 测序结果与分析 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 4.1 载体的选择 | 第34-35页 |
| 4.2 酶切位点及抗生素的使用选择 | 第35页 |
| 4.3 SWISS建模 | 第35-36页 |
| 第三章 人和人参Cu/Zn-SOD蛋白的表达纯化及活性分析 | 第36-52页 |
| 1 材料与方法 | 第36-37页 |
| 1.1 主要溶液的配制 | 第36-37页 |
| 1.2 主要使用仪器及设备 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-41页 |
| 2.1 SOD蛋白的表达 | 第37-38页 |
| 2.1.1 SOD在不同浓度IPTG浓度下的表达情况 | 第38页 |
| 2.1.2 SOD在不同诱导时间下的表达情况 | 第38页 |
| 2.1.3 SOD在不同温度下的表达情况 | 第38页 |
| 2.2 蛋白纯化 | 第38-39页 |
| 2.2.1 Superdex 75 10/300 GL纯化 | 第39页 |
| 2.2.2 Hitrap DEAE FF纯化 | 第39页 |
| 2.3 蛋白浓度的测定 | 第39-40页 |
| 2.4 SOD蛋白的活性测定 | 第40页 |
| 2.5 不同PH对两种酶活性的影响 | 第40-41页 |
| 2.6 不同温度对两种酶活性的影响 | 第41页 |
| 3 结果与分析 | 第41-50页 |
| 3.1 SOD表达结果 | 第41-42页 |
| 3.2 SOD时间梯度诱导结果 | 第42-43页 |
| 3.3 SOD温度梯度诱导结果 | 第43-44页 |
| 3.4 SOD IPTG浓度梯度诱导结果 | 第44-45页 |
| 3.5 SOD纯化结果 | 第45-47页 |
| 3.6 SOD浓度的测定 | 第47-48页 |
| 3.7 SOD活性鉴定结果 | 第48-49页 |
| 3.8 温度对SOD活性的影响 | 第49页 |
| 3.9 PH对SOD活性的影响 | 第49-50页 |
| 4 讨论 | 第50-52页 |
| 4.1 蛋白诱导表达 | 第50-51页 |
| 4.2 蛋白纯化及活性测定 | 第51-52页 |
| 结论 | 第52-53页 |
| 参考文献 | 第53-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 附录 | 第62页 |
