| 摘要 | 第10-11页 |
| 英文摘要 | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第14-29页 |
| 1.1 IHN的流行及危害 | 第14-15页 |
| 1.2 IHN病原学 | 第15-19页 |
| 1.2.1 IHNV的分类地位 | 第15-16页 |
| 1.2.2 IHNV的培养特性 | 第16页 |
| 1.2.3 IHNV的基因组结构 | 第16-17页 |
| 1.2.4 IHNV主要结构与非结构蛋白及其功能 | 第17-19页 |
| 1.2.5 IHNV的基因型与毒力 | 第19页 |
| 1.3 病毒对细胞NF-κB信号通路的调控作用 | 第19-26页 |
| 1.3.1 NF-κB信号通路的组成 | 第20页 |
| 1.3.2 NF-κB信号通路激活与抑制的分子机制 | 第20-22页 |
| 1.3.3 NF-κB信号通路激活与抑制对病毒复制的影响 | 第22-26页 |
| 1.4 利用反向遗传操作对NV基因功能的研究 | 第26-27页 |
| 1.5 本试验研究的目的和意义 | 第27-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第29-32页 |
| 2.1.1 病毒、细胞、抗体 | 第29页 |
| 2.1.2 质粒与菌株 | 第29页 |
| 2.1.3 主要试剂和耗材 | 第29-31页 |
| 2.1.4 引物 | 第31-32页 |
| 2.2 实验方法 | 第32-47页 |
| 2.2.1 IHNV的增殖 | 第32页 |
| 2.2.2 IHNV不同基因N、P、M、G、NV、L扩增 | 第32-34页 |
| 2.2.3 重组质粒pCI-N、pCI-P、pCI-M、pCI-G、pCI-NV、pCI-L构建 | 第34-36页 |
| 2.2.4 重组真核表达质粒pCI-N、pCI-P、pCI-M、pCI-G、pCI-NV、pCI-L转染与表达 | 第36-37页 |
| 2.2.5 双荧光素酶检测NF-κB的活性 | 第37-38页 |
| 2.2.6 转染pCI-NV质粒并感染SeV对NF-κB下游促炎因子的测定 | 第38页 |
| 2.2.7 IHNV NV(32EGDL35)位点缺失重组病毒cDNA的构建 | 第38-42页 |
| 2.2.8 IHNV NV(32EGDL35)位点缺失重组病毒的拯救 | 第42页 |
| 2.2.9 IHNV NV(32EGDL35)位点缺失重组病毒的鉴定 | 第42-44页 |
| 2.2.10 IHNV NV不同位点缺失的重组病毒生物学特性研究 | 第44页 |
| 2.2.11 IHNV NV不同位点缺失的重组病毒致病性试验 | 第44-47页 |
| 3 结果 | 第47-80页 |
| 3.1 IHNV的增殖及TCIDso的测定结果 | 第47页 |
| 3.2 IHNV感染细胞对NF-κB活性的影响 | 第47-49页 |
| 3.3 影响NF-κB活性的IHNV蛋白筛选 | 第49-53页 |
| 3.3.1 IHNV蛋白真核表达质粒的构建 | 第49-50页 |
| 3.3.2 IHNVN、P、M、G、NV和L蛋白的真核细胞的表达 | 第50-51页 |
| 3.3.3 影响NF-κB活性的IHNV蛋白筛选 | 第51-52页 |
| 3.3.4 不同剂量IHNV L蛋白对NF-κB活性的影响 | 第52-53页 |
| 3.4 IHNV NV对NF-κB抑制作用 | 第53-62页 |
| 3.4.1 不同剂量IHNV NV蛋白对NF-κB活性的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.2 IHNV NV对SeV诱导的NF-κB活性的影响 | 第54-55页 |
| 3.4.3 IHNV NV抑制NF-κB的功能域的确定 | 第55-61页 |
| 3.4.4 转染pCI-NV质粒并感染SeV对细胞IKBα及NF-κB核转移的影响 | 第61-62页 |
| 3.4.5 转染pCI-NV质粒并感染SeV对NF-κB下游促炎因子表达的影响 | 第62页 |
| 3.5 缺失NV不同位点重组IHNV CDNA的构建 | 第62-66页 |
| 3.5.1 NV(~(32)EGDL~(35))位点缺失的重组F3片段的扩增PCR鉴定结果 | 第63页 |
| 3.5.2 突变的重组F3片段与克隆载体连接的鉴定结果 | 第63-64页 |
| 3.5.3 重组中间载体的鉴定结果 | 第64-65页 |
| 3.5.4 pCI-NV_(Q32-35)和pCI-NV_(T32-35)重组真核表达质粒的鉴定结果 | 第65-66页 |
| 3.6 重组病毒rIHNV-NV_(Q32-35)和rIHNV-NV_(T32-35)鉴定结果 | 第66-72页 |
| 3.6.1 重组病毒感染CHSE-214细胞CPE观察结果 | 第66-67页 |
| 3.6.2 重组病毒rIHNV-NV_(Q32-35)和rIHNV-NV_(T32-35)间接免疫荧光鉴定结果 | 第67-68页 |
| 3.6.3 重组病毒rIHNV-NV_(Q32-35)和rIHNV-NV_(T32-35) RT-PCR鉴定结果 | 第68-69页 |
| 3.6.4 重组病毒rIHNV-NV_(Q32-35)和rIHNV-NV_(T32-35)分子标识的鉴定结果 | 第69-71页 |
| 3.6.5 重组病毒rIHNV-NV_(Q32-35)和rIHNV-NV_(T32-35)病毒粒子形态的观察 | 第71-72页 |
| 3.7 重组病毒rIHNV-NV_(Q32-35)和rIHNV-NV_(T32-35)对NF-κB核转移的影响 | 第72页 |
| 3.8 重组病毒rIHNV-NV_(Q32-35)和rIHNV-NV_(T32-35)的一步生长曲线测定 | 第72-73页 |
| 3.9 重组病毒rIHNV-NV_(Q32-35)和rIHNV-NV_(T32-35)在不同细胞的繁殖特性及遗传稳定性 | 第73-74页 |
| 3.10 重组病毒rIHNV-NV_(Q32-35)和rIHNV-NV_(T32-35)的致病性 | 第74-80页 |
| 3.10.1 累积死亡率测定 | 第74-75页 |
| 3.10.2 重组病毒感染虹鳟组织病理变化 | 第75-76页 |
| 3.10.3 虹鳟稚鱼感染病毒后细胞因子表达情况 | 第76-78页 |
| 3.10.4 虹鳟感染亲本病毒和重组病毒后组织中病毒载量的测定 | 第78-80页 |
| 4 讨论 | 第80-86页 |
| 4.1 IHNV对NF-κB信号通路的影响 | 第80-81页 |
| 4.2 IHNV NV抑制NF-κB信号通路的分子机制 | 第81-82页 |
| 4.3 IHNV NV不同位点对病毒复制和病毒毒力的影响 | 第82-84页 |
| 4.4 IHNV NV(~(32)EGDL~(35))位点缺失重组病毒构建与病毒的拯救 | 第84-86页 |
| 5 结论 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-88页 |
| 参考文献 | 第88-98页 |
| 附录 | 第98-104页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第104页 |
