| 摘要 | 第4-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 英文缩略词表 | 第12-13页 |
| 第一章 综述 | 第13-21页 |
| 1.1 体细胞重编程技术发展历程 | 第13-17页 |
| 1.1.1 体细胞重编程的几个发展阶段 | 第13-14页 |
| 1.1.2 P53基因与iPS细胞的研究 | 第14-15页 |
| 1.1.3 诱导多能性干细胞的机制研究 | 第15-17页 |
| 1.2 Dlkl-Dio3区域基因簇 | 第17-21页 |
| 1.2.1 Dlk1-Dio3区域结构 | 第17-18页 |
| 1.2.2 诱导多能性干细胞Dlk1-Dio3印记区域调控机制 | 第18-21页 |
| 第二章 利用外源转录因子诱导P53基因敲除的小鼠胚胎成纤维细胞的研究 | 第21-44页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-25页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.1.2 载体信息 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要试剂与溶液配方 | 第23-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-35页 |
| 2.2.1 小鼠原代成纤维细胞MEF的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.2 饲养层的制备 | 第26页 |
| 2.2.3 转录四因子旳提取 | 第26-27页 |
| 2.2.4 Plat-E包装细胞及P53~（+/-）P53~（-/-）细胞的准备 | 第27页 |
| 2.2.5 逆转录病毒包装(细胞转染) | 第27-28页 |
| 2.2.6 P53~（+/-）P53~（-/-）MEF传代 | 第28页 |
| 2.2.7 逆转录病毒的收集和浓缩(转染后48小时) | 第28页 |
| 2.2.8 P53~(+/-)、P53~(-/-)MEF细胞iPS的诱导 | 第28-29页 |
| 2.2.9 单克隆的挑取和扩大培养 | 第29-30页 |
| 2.2.10 碱性磷酸酶染色 | 第30-31页 |
| 2.2.11 iPS细胞多潜能性marker的免疫荧光染色 | 第31-32页 |
| 2.2.12 RT-PCR检测小鼠iPS细胞多能性相关基因的表达 | 第32-35页 |
| 2.3 实验结果 | 第35-42页 |
| 2.3.1 逆转录病毒包装 | 第35-36页 |
| 2.3.2 逆转录病毒(pMXs-GFP质粒)感染P53~(-/-)MEF效率分析 | 第36-37页 |
| 2.3.3 利用逆转录病毒感染P53~(+/-)、P53~(-/-)MEF | 第37-38页 |
| 2.3.4 利用慢病毒四因子诱导P53~(+/-)MEF | 第38-39页 |
| 2.3.5 RT-PCR检测内外源多潜能性四因子的表达情况 | 第39-40页 |
| 2.3.6 iPS细胞碱性磷酸酶染色结果 | 第40-41页 |
| 2.3.7 iPS细胞多潜能性marker免疫荧光染色结果 | 第41-42页 |
| 2.4 结果讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 利用非整合方法诱导耳聋病人耳后成纤维细胞 | 第44-54页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第44-46页 |
| 3.2 实验方法 | 第46-50页 |
| 3.2.1 病人耳皮肤成纤维细胞的原代培养 | 第46-47页 |
| 3.2.2 人耳皮肤成纤维细胞的传代 | 第47页 |
| 3.2.3 耳皮肤成纤维细胞的电转 | 第47-48页 |
| 3.2.4 耳皮肤成纤维细胞的诱导 | 第48-49页 |
| 3.2.5 人iPS克隆的挑取和传代 | 第49-50页 |
| 3.2.6 人iPS细胞的碱性磷酸酶染色 | 第50页 |
| 3.2.7 人iPS细胞多潜能性marker免疫荧光染色 | 第50页 |
| 3.2.8 人iPS细胞RNA抽提及cDNA合成 | 第50页 |
| 3.3 实验结果 | 第50-53页 |
| 3.3.1 人耳皮肤成纤维细胞的原代培养 | 第50-51页 |
| 3.3.2 电转Episomal质粒诱导人耳皮肤成纤维细胞 | 第51页 |
| 3.3.3 人iPS细胞碱性磷酸酶染色结果 | 第51-52页 |
| 3.3.4 人iPS细胞多潜能性marker免疫荧光染色结果 | 第52-53页 |
| 3.4 结果讨论 | 第53-54页 |
| 第四章 K9000在细胞培养中去除支原体污染的检测 | 第54-66页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第54-55页 |
| 4.2 试验方法 | 第55-58页 |
| 4.2.1 K9000对293T细胞的毒性实验 | 第55-56页 |
| 4.2.2 K9000对MEF和MSC的毒性试验 | 第56页 |
| 4.2.3 K9000对HSF1的毒性试验 | 第56-57页 |
| 4.2.4 PCR法检测细胞培养中的支原体污染 | 第57-58页 |
| 4.3 试验结果 | 第58-64页 |
| 4.3.1 K9000对293T细胞的毒性试验结果 | 第58-59页 |
| 4.3.2 K9000对MSC的毒性试验结果 | 第59-61页 |
| 4.3.3 K9000对HSF1与MEF的毒性试验结果 | 第61-64页 |
| 4.4 结果讨论 | 第64-66页 |
| 小结 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文情况 | 第71页 |
