| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-26页 |
| 1.1 高等植物启动子的研究概况 | 第13-19页 |
| 1.1.1 启动子的概念和特征 | 第13页 |
| 1.1.1.1 启动子的概念 | 第13页 |
| 1.1.1.2 启动子的特征 | 第13页 |
| 1.1.2 启动子的类型 | 第13-15页 |
| 1.1.2.1 组成型启动子 | 第14页 |
| 1.1.2.2 组织特异型启动子 | 第14页 |
| 1.1.2.3 诱导型启动子 | 第14-15页 |
| 1.1.3 启动子的结构特点 | 第15-16页 |
| 1.1.3.1 转录起点 | 第15页 |
| 1.1.3.2 启动子区 | 第15-16页 |
| 1.1.3.3 特殊的上游顺式作用元件 | 第16页 |
| 1.1.4 启动子克隆的意义 | 第16-17页 |
| 1.1.5 启动子的研究和应用概况 | 第17-19页 |
| 1.1.5.1 植物启动子的克隆方法 | 第17-18页 |
| 1.1.5.2 启动子功能的分析方法 | 第18-19页 |
| 1.2 植物的分枝 | 第19-22页 |
| 1.2.1 植物分枝或分蘖发生的分子机理研究 | 第19-21页 |
| 1.2.2 小麦分蘖发生的规律 | 第21-22页 |
| 1.2.3 小麦分蘖发生的影响因素 | 第22页 |
| 1.3 CRISPR/Cas系统 | 第22-24页 |
| 1.3.1 CRISPR/Cas系统的研究背景 | 第22页 |
| 1.3.2 CRISPR/Cas系统的基本结构 | 第22-23页 |
| 1.3.3 CRISPR/Cas系统的工作原理 | 第23-24页 |
| 1.3.4 CRISPR/Cas系统的功能 | 第24页 |
| 1.4 本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第26-28页 |
| 2.1.1 植物材料及其生长条件 | 第26页 |
| 2.1.2 菌株与质粒 | 第26页 |
| 2.1.3 酶及生化试剂 | 第26页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第26页 |
| 2.1.5 PCR引物 | 第26-28页 |
| 2.2 实验方法 | 第28-42页 |
| 2.2.1 小麦基因组的提取(CTAB法) | 第28页 |
| 2.2.2 小麦RNA的提取(试剂盒法) | 第28-29页 |
| 2.2.3 反转录cDNA第一链的合成 | 第29-30页 |
| 2.2.4 Semi-quantitativeReal-TimePCR分析 | 第30页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第30-31页 |
| 2.2.6 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.2.7 PTaMOC1-7D及其CAT-box破坏片段的拟南芥和小麦的表达载体构建 | 第32-36页 |
| 2.2.7.1 PCR扩增目的片段 | 第32页 |
| 2.2.7.2 琼脂糖凝胶DNA回收(试剂盒法) | 第32-33页 |
| 2.2.7.3 连入克隆载体 | 第33页 |
| 2.2.7.4 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第33页 |
| 2.2.7.5 大肠杆菌的菌落PCR鉴定 | 第33-34页 |
| 2.2.7.6 DNA序列测定 | 第34页 |
| 2.2.7.7 质粒提取 | 第34页 |
| 2.2.7.8 质粒DNA的酶切回收 | 第34-35页 |
| 2.2.7.9 连入表达载体 | 第35-36页 |
| 2.2.7.10 冻融法转化农杆菌 | 第36页 |
| 2.2.8 pBUE411-TaMOC1-Cas9小麦表达载体的构建 | 第36-40页 |
| 2.2.8.1 PCR扩增目的片段 | 第36-37页 |
| 2.2.8.2 PCR扩增产物的纯化回收 | 第37页 |
| 2.2.8.3 酶切-连接 | 第37-38页 |
| 2.2.8.4 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第38页 |
| 2.2.8.5 大肠杆菌的菌落PCR鉴定 | 第38页 |
| 2.2.8.6 DNA序列测定 | 第38-39页 |
| 2.2.8.7 质粒提取 | 第39页 |
| 2.2.8.8 冻融法转化农杆菌 | 第39-40页 |
| 2.2.9 拟南芥植株的培养与转化 | 第40页 |
| 2.2.9.1 种子消毒与培养 | 第40页 |
| 2.2.9.2 花器官浸渍遗传转化法 | 第40页 |
| 2.2.10 小麦幼胚的遗传转化 | 第40-42页 |
| 2.2.10.1 小麦的幼胚取材 | 第40页 |
| 2.2.10.2 农杆菌浸染小麦幼胚愈伤 | 第40-41页 |
| 2.2.10.3 共培养 | 第41页 |
| 2.2.10.4 筛选抗性愈伤 | 第41页 |
| 2.2.10.5 抗性愈伤的分化 | 第41页 |
| 2.2.10.6 壮苗、春化及种植 | 第41页 |
| 2.2.10.7 阳性苗的鉴定 | 第41-42页 |
| 3 结果与分析 | 第42-53页 |
| 3.1 TaMOC1-7A、TaMOC1-7B、TaMOC1-7D的表达模式分析 | 第42页 |
| 3.2 TaMOC1基因启动子的克隆 | 第42-43页 |
| 3.3 TaMOC1基因的启动子序列顺式作用元件分析 | 第43-44页 |
| 3.4 PTaMOC1-7D::GUS、PTaMOC1-7DP1::GUS和PTaMOC1-7DP2::GUS表达载体的拟南芥遗传转化 | 第44-46页 |
| 3.4.1 PCR鉴定 | 第45页 |
| 3.4.2 转基因植株的GUS活性检测 | 第45-46页 |
| 3.5 PTaMOC1-7D::GUS的小麦遗传转化 | 第46-49页 |
| 3.5.1 除草剂筛选 | 第47-48页 |
| 3.5.2 PCR鉴定 | 第48页 |
| 3.5.3 PTaMOC1-7D::GUS转基因小麦的GUS活性检测 | 第48-49页 |
| 3.6 CRISPR/Cas的方法构建TaMOC1定点突变的转基因植株 | 第49-53页 |
| 3.6.1 PCR鉴定 | 第49-51页 |
| 3.6.2 测序确认靶位点突变方式 | 第51页 |
| 3.6.3 转基因小麦pBUE411-TaMOC1-Cas的定量分析 | 第51-53页 |
| 4 讨论 | 第53-57页 |
| 4.1 TaMOC1-7A/7B/7D基因的表达模式 | 第53页 |
| 4.2 TaMOC1启动子的克隆 | 第53-54页 |
| 4.3 TaMOC1启动子顺式作用元件的分析 | 第54页 |
| 4.4 TaMOC1的启动子结构CAT-box对其启动子表达调控的影响 | 第54-55页 |
| 4.5 小麦的遗传转化 | 第55-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附录一 | 第65-69页 |
| 附录二 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
