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马铃薯甲虫黑色素合成相关基因的克隆、功能研究及其RNAi效应初探

摘要第6-9页
Abstract第9-12页
第1章 文献综述第15-29页
    1.1 马铃薯甲虫概述第15-17页
        1.1.1 马铃薯甲虫的发生与危害第15-16页
        1.1.2 马铃薯甲虫的防治第16-17页
    1.2 昆虫黑色素合成基因的研究进展第17-20页
        1.2.1 果蝇黑色素合成途径基因的研究第18-19页
        1.2.2 家蚕黑色素合成途径基因的研究第19页
        1.2.3 赤拟谷盗黑色素合成途径基因的研究第19-20页
        1.2.4 其他昆虫黑色素合成途径基因的研究第20页
    1.3 昆虫激素的研究进展第20-22页
        1.3.1 保幼激素在昆虫生活史中的影响第21页
        1.3.2 蜕皮激素在昆虫生活史中的影响第21-22页
        1.3.3 保幼激素和蜕皮激素协同调控马铃薯甲虫的生活史第22页
    1.4 RNA干扰的研究进展第22-26页
        1.4.1 RNAi的应用前景第23页
        1.4.2 RNAi的作用机制第23页
        1.4.3 马铃薯甲虫RNAi技术的研究方法第23-26页
        1.4.4 系统性RNAi第26页
    1.5 基于昆虫黑色素合成途径的JH/RNAi和MH/RNAi的交叉对话第26-27页
    1.6 本研究的立题背景及意义第27-29页
第2章 马铃薯甲虫NBAD水解酶基因的克隆及对保幼激素和蜕皮激素的响应第29-44页
    2.1 材料与方法第29-38页
        2.1.1 供试昆虫第29页
        2.1.2 主要试剂与仪器设备第29-30页
        2.1.3 马铃薯甲虫NBAD水解酶tan基因的获取第30页
        2.1.4 马铃薯甲虫总RNA的提取第30-31页
        2.1.5 cDNA第一链的合成第31-32页
        2.1.6 引物设计和dsRNA原核表达系统的构建第32页
        2.1.7 PCR反应体系及条件第32-33页
        2.1.8 PCR产物的回收纯化第33-34页
        2.1.9 连接和转化实验第34-35页
        2.1.10 测序分析第35页
        2.1.11 生物信息学分析第35-36页
        2.1.12 喂食dsRNA菌液的制备第36页
        2.1.13 喂食dsRNA的室内生物测定第36页
        2.1.14 实时荧光定量PCR(qPCR)第36-38页
        2.1.15 统计分析第38页
    2.2 结果与分析第38-43页
        2.2.1 马铃薯甲虫NBAD水解酶的多序列比对及进化分析第38-39页
        2.2.2 马铃薯甲虫发育过程中tan基因的时空表达第39-40页
        2.2.3 dstan对马铃薯甲虫生长发育的影响第40-42页
        2.2.4 干涉保幼激素和蜕皮激素合成和信号传导基因对Ldtan表达的影响第42-43页
    2.3 结论与讨论第43-44页
第3章 马铃薯甲虫黄体基因Yellow家族的克隆及功能验证第44-58页
    3.1 材料及方法第44-48页
        3.1.1 马铃薯甲虫的饲养及实验材料处理第44页
        3.1.2 目标基因的获取第44-45页
        3.1.3 RACE-PCR反应体系及条件第45-46页
        3.1.4 分子克隆和dsRNA合成第46-47页
        3.1.5 qPCR第47页
        3.1.6 室内RNAi试验第47-48页
        3.1.7 统计分析第48页
    3.2 结果与分析第48-57页
        3.2.1 马铃薯甲虫黄体基因家族的的多序列比对及进化分析第48-52页
        3.2.2 马铃薯甲虫发育过程中黄体家族基因的时空表达模式第52-57页
    3.3 结论与讨论第57-58页
第4章 马铃薯黑檀体基因克隆与保幼激素蜕皮激素的响应及分子进化的研究第58-71页
    4.1 材料及方法第58-61页
        4.1.1 马铃薯甲虫的饲养及实验材料处理第58页
        4.1.2 目标基因的获取第58页
        4.1.3 分子克隆和dsRNA合成第58-59页
        4.1.4 室内生物测定第59-60页
        4.1.5 qPCR第60页
        4.1.6 统计分析第60页
        4.1.7 生物信息学分析第60-61页
    4.2 结果与分析第61-68页
        4.2.1 马铃薯甲虫NBAD合成酶(黑檀体基因)的多重序列比对及系统发育分析第61-63页
        4.2.2 马铃薯甲虫发育过程中NBAD合成酶(黑檀体基因)的时空表达第63-64页
        4.2.3 NBAD合成酶对马铃薯甲虫生长发育的影响第64-65页
        4.2.4 干扰保幼激素和蜕皮激素合成和信号转导基因对黑檀体基因表达的影响第65-66页
        4.2.5 马铃薯甲虫黑檀体基因的进化分析第66-67页
        4.2.6 马铃薯甲虫黑檀体基因的大田盆栽试验第67-68页
    4.3 结论与讨论第68-71页
第5章 全文总结与展望第71-73页
    5.1 全文总结第71页
    5.2 展望第71-73页
参考文献第73-83页
致谢第83-84页
作者简介第84页
攻读硕士学位期间参加的学术会议第84页

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