| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 第1章 文献综述 | 第11-29页 |
| 1.1 前言 | 第11页 |
| 1.2 芽孢杆菌产生的抗菌物质 | 第11-17页 |
| 1.2.1 核糖体途径合成的肽(细菌素) | 第11-13页 |
| 1.2.2 非核糖体途径合成的肽(NRPs)和聚酮化合物(PKs) | 第13-16页 |
| 1.2.3 芽孢杆菌产抗菌物质的应用现状 | 第16-17页 |
| 1.3 羊毛硫抗生素(lantibiotics) | 第17-25页 |
| 1.3.1 羊毛硫抗生素的分类 | 第17-18页 |
| 1.3.2 羊毛硫抗生素的翻译后修饰(PTMs) | 第18-21页 |
| 1.3.3 羊毛硫抗生素的结构和抗菌机制 | 第21-22页 |
| 1.3.4 Mersacidin-由芽孢杆菌生产的II型羊毛硫抗生素 | 第22-24页 |
| 1.3.5 Nisin的生物合成 | 第24页 |
| 1.3.6 羊毛硫抗生素的基因工程应用 | 第24-25页 |
| 1.4 基因组探测法(genomemining)预测抗菌物质 | 第25-28页 |
| 1.4.1 BAGEL3 | 第26页 |
| 1.4.2 antiSMASH | 第26-28页 |
| 1.5 本文的研究意义和内容 | 第28-29页 |
| 第2章 一株从蜂蜜中分离的芽孢杆菌BH072及其产抗菌物质的鉴定 | 第29-47页 |
| 2.1 前言 | 第29-30页 |
| 2.2 材料和方法 | 第30-36页 |
| 2.2.1 实验仪器和药品 | 第30-32页 |
| 2.2.2 显微镜观察和生理生化鉴定 | 第32-33页 |
| 2.2.3 16S rDNA鉴定 | 第33页 |
| 2.2.4 系统进化树的构建 | 第33页 |
| 2.2.5 抗菌物质基因的克隆 | 第33-34页 |
| 2.2.6 鞭毛蛋白flagellin纯化和鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.7 iturinA的纯化提取 | 第35页 |
| 2.2.8 芽胞杆菌BH072抑菌谱的测定 | 第35页 |
| 2.2.9 酶,pH和温度对抗真菌活性的影响 | 第35-36页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第36-44页 |
| 2.3.1 形态学、生理学和生物化学的特点 | 第36-37页 |
| 2.3.2 16rDNA序列分析和系统进化树构建 | 第37-38页 |
| 2.3.3 抗真菌肽的抑菌作用 | 第38页 |
| 2.3.4 抗真菌基因的检测 | 第38-39页 |
| 2.3.5 鞭毛蛋白flagellin的纯化与鉴定 | 第39-41页 |
| 2.3.6 LC-MS测定抗真菌产物iturinA | 第41-44页 |
| 2.3.7 酶,pH和温度对抗真菌活性的影响 | 第44页 |
| 2.4 传统分离策略的优缺点 | 第44-45页 |
| 2.5 小结 | 第45-47页 |
| 第3章 响应面方法优化芽孢杆菌BH072的抗真菌脂肽生产 | 第47-63页 |
| 3.1 前言 | 第47-48页 |
| 3.2 材料和方法 | 第48-54页 |
| 3.2.1 微生物和培养基 | 第48页 |
| 3.2.2 生长曲线和发酵时间对抗真菌活性的曲线的测定 | 第48-49页 |
| 3.2.3 iturinA的提取和质量浓度计算 | 第49页 |
| 3.2.4 iturinA抗真菌活性的测定 | 第49页 |
| 3.2.5 优化发酵条件的分析方法 | 第49-51页 |
| 3.2.6 优化发酵培养基组分的分析方法 | 第51-53页 |
| 3.2.7 统计分析 | 第53-54页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第54-60页 |
| 3.3.1 生长曲线和发酵时间对抗真菌活性曲线 | 第54页 |
| 3.3.2 优化发酵条件的分析结果 | 第54-57页 |
| 3.3.3 优化培养基组分的分析结果 | 第57-60页 |
| 3.4 与其他菌iturinA产量比较分析 | 第60-61页 |
| 3.5 小结 | 第61-63页 |
| 第4章 芽孢杆菌BH072全基因组测序及抗菌基因探测 | 第63-111页 |
| 4.1 前言 | 第63-64页 |
| 4.2 材料和方法 | 第64-65页 |
| 4.2.1 芽孢杆菌BH072全基因组序列测定 | 第64页 |
| 4.2.2 基因组序列获取 | 第64页 |
| 4.2.3 利用BAGEL3和antiSMASH对抗菌基因簇进行基因组探测 | 第64-65页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第65-77页 |
| 4.3.1 核糖体途径合成的抗菌肽(细菌素) | 第66-73页 |
| 4.3.2 非核糖体合成肽(NRPs)和聚酮化合物(PKs) | 第73-77页 |
| 4.4 芽孢杆菌产抗菌物质的分布及潜力分析 | 第77-80页 |
| 4.5 基因组探测策略的优缺点 | 第80页 |
| 4.6 小结 | 第80-81页 |
| 附表 | 第81-111页 |
| 第5章 使用nisin合成机制在乳酸乳球菌中生产I和II类杂合羊毛硫抗生素 | 第111-131页 |
| 5.1 前言 | 第111-113页 |
| 5.2 材料和方法 | 第113-121页 |
| 5.2.1 细菌菌株、质粒和生长条件 | 第113-115页 |
| 5.2.2 分子克隆 | 第115页 |
| 5.2.3 表达载体的构建 | 第115-120页 |
| 5.2.4 蛋白表达与纯化 | 第120页 |
| 5.2.5 MALDI-TOF质谱分析 | 第120页 |
| 5.2.6 CDAP标记法分析游离的半胱氨酸 | 第120页 |
| 5.2.7 抑菌活性检测 | 第120-121页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第121-129页 |
| 5.3.1 前体肽表达与纯化 | 第121-122页 |
| 5.3.2 Ⅰ和 Ⅱ类杂合羊毛硫抗生素可以被nisin修饰酶和GdmD修饰 | 第122-127页 |
| 5.3.3 经修饰酶作用后的杂合体抗菌肽具有显著的抗菌作用 | 第127-128页 |
| 5.3.4 修饰酶LanD和NisBC的作用机制解析 | 第128-129页 |
| 5.4 基因工程策略的优缺点 | 第129页 |
| 5.5 小结 | 第129-131页 |
| 第6章 结论与展望 | 第131-135页 |
| 6.1 结论 | 第131-133页 |
| 6.2 创新点 | 第133页 |
| 6.3 展望 | 第133-135页 |
| 参考文献 | 第135-163页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第163-165页 |
| 致谢 | 第165-166页 |
