| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 缩写符号 | 第16-17页 |
| 表格索引 | 第17-18页 |
| 图形索引 | 第18-23页 |
| 第一章 文献综述 | 第23-51页 |
| 1 面粉品质改良添加剂应用现状 | 第23-26页 |
| 1.1 化学添加剂在面粉品质改良中的应用 | 第23-24页 |
| 1.2 酶制剂在面粉品质改良中的应用及机制 | 第24-26页 |
| 2 脂肪氧合酶研究进展 | 第26-32页 |
| 2.1 脂肪氧合酶来源 | 第26页 |
| 2.2 脂肪氧合酶的分子结构 | 第26-28页 |
| 2.3 脂肪氧合酶的催化性质 | 第28-29页 |
| 2.4 脂肪氧合酶基因的克隆和表达 | 第29-31页 |
| 2.5 脂肪氧合酶的应用现状 | 第31-32页 |
| 3. 枯草芽孢杆菌分泌表达外源基因研究进展 | 第32-39页 |
| 3.1 枯草芽孢杆菌表达系统概述 | 第32-33页 |
| 3.2 枯草芽孢杆菌表达系统的宿主 | 第33-34页 |
| 3.3 枯草芽孢杆菌表达系统的载体 | 第34-36页 |
| 3.4 枯草芽孢杆菌分泌外源基因的途径及信号肽 | 第36-37页 |
| 3.5 枯草芽孢杆菌表达存在的问题和发展方向 | 第37-39页 |
| 4 食品级工程菌简介 | 第39-40页 |
| 5 本研究的目的、意义及内容 | 第40-42页 |
| 参考文献 | 第42-51页 |
| 第二章 Anabaena sp.PCC 7120脂肪氧合酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 | 第51-81页 |
| 1. 材料与方法 | 第51-62页 |
| 1.1 材料 | 第51-54页 |
| 1.1.1 菌株与质粒 | 第51-53页 |
| 1.1.2 试剂 | 第53页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第53-54页 |
| 1.1.4 培养基 | 第54页 |
| 1.2 方法 | 第54-62页 |
| 1.2.1 Anabaena sp.PCC 7120脂肪氧合酶基因的搜索 | 第54页 |
| 1.2.2 Anabaena sp.PCC 7120脂肪氧合酶基因的克隆 | 第54-55页 |
| 1.2.3 PCR产物与pMD19-T克隆载体的连接 | 第55页 |
| 1.2.4 大肠杆菌感受态的制备 | 第55页 |
| 1.2.5 载体转化大肠杆菌感受态细胞 | 第55页 |
| 1.2.6 阳性克隆子的鉴定 | 第55-56页 |
| 1.2.7 大肠杆菌ana-LOX基因重组表达载体的构建 | 第56-59页 |
| 1.2.8 目的基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第59页 |
| 1.2.9 SDS-PAGE分析 | 第59页 |
| 1.2.10 脂肪氧合酶活性测定 | 第59-60页 |
| 1.2.11 表达形式鉴定 | 第60页 |
| 1.2.12 重组质粒稳定性检测 | 第60页 |
| 1.2.13 重组蛋白的纯化 | 第60-61页 |
| 1.2.14 重组酶酶学性质研究 | 第61-62页 |
| 2. 结果与分析 | 第62-75页 |
| 2.1 Anabaena sp.PCC 7120脂肪氧合酶基因的序列分析 | 第62-64页 |
| 2.2 Anabaena sp.PCC 7120脂肪氧合酶基因ana-LOX的扩增 | 第64-65页 |
| 2.3 pET-23a-ana-LOX的构建 | 第65页 |
| 2.4 pET-32a-ana-LOX的构建 | 第65-66页 |
| 2.5 pGS21a-ana-LOX的构建 | 第66页 |
| 2.6 Ana-LOX基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第66-70页 |
| 2.7 重组ana-LOX蛋白表达形式鉴定 | 第70-71页 |
| 2.8 重组质粒稳定性检测 | 第71页 |
| 2.9 重组ana-LOX分离纯化 | 第71-72页 |
| 2.10 重组ana-LOX性质研究 | 第72-75页 |
| 3. 讨论 | 第75-76页 |
| 4. 本章小结 | 第76-78页 |
| 参考文献 | 第78-81页 |
| 第三章 Anabaena sp.PCC 7120脂肪氧合酶基因的定点突变及其基因长度的研究 | 第81-93页 |
| 1 材料与方法 | 第81-87页 |
| 1.1 材料 | 第81-82页 |
| 1.1.1 菌株与载体 | 第81页 |
| 1.1.2 试剂 | 第81页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第81-82页 |
| 1.1.4 培养基 | 第82页 |
| 1.2 方法 | 第82-87页 |
| 1.2.1突变位点的选择 | 第82页 |
| 1.2.2 引物设计 | 第82-84页 |
| 1.2.3 SOE-PCR法进行定点突变 | 第84-85页 |
| 1.2.4 逐步缩短ana-LOX基因长度策略 | 第85-86页 |
| 1.2.5 PCR产物与pMD19-T的连接 | 第86页 |
| 1.2.6 大肠杆菌感受态制备 | 第86页 |
| 1.2.7 载体pMD19-T连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第86页 |
| 1.2.8 目的基因与表达载体的连接 | 第86页 |
| 1.2.9 阳性克隆的筛选、鉴定与测序 | 第86页 |
| 1.2.10 重组表达载体转化大肠杆菌感受态细胞 | 第86页 |
| 1.2.11 重组酶的诱导表达 | 第86-87页 |
| 1.2.12 SDS-PAGE | 第87页 |
| 1.2.13 重组酶活性测定 | 第87页 |
| 2 结果与分析 | 第87-90页 |
| 2.1 Ana-LOX基因定点突变研究 | 第87-89页 |
| 2.1.1 定点突变位点的选择 | 第87-88页 |
| 2.1.2 突变酶基因的克隆 | 第88页 |
| 2.1.3 突变酶基因的表达 | 第88-89页 |
| 2.2 Mini-ana-LOX基因长度的确定 | 第89-90页 |
| 2.2.1 缩短长度Ana-LOX基因的克隆 | 第89页 |
| 2.2.2 缩短长度ana-LOX基因的表达 | 第89-90页 |
| 3 讨论 | 第90-91页 |
| 4 小结 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-93页 |
| 第四章 枯草杆菌表达载体的构建及Anabaena sp.PCC 7120脂肪氧合酶在WB800中的表达 | 第93-125页 |
| 1 材料与方法 | 第93-105页 |
| 1.1 材料 | 第93-97页 |
| 1.1.1 菌株与质粒 | 第93-95页 |
| 1.1.2 试剂 | 第95-96页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第96页 |
| 1.1.4 培养基 | 第96-97页 |
| 1.2 方法 | 第97-105页 |
| 1.2.1 基因在大肠杆菌的亚克隆 | 第97页 |
| 1.2.2 枯草杆菌基因组DNA的提取 | 第97页 |
| 1.2.3 Ana-Lox基因的克隆 | 第97-98页 |
| 1.2.4 pHPY的构建 | 第98-99页 |
| 1.2.5 pHPQR和pHPYR的构建 | 第99-100页 |
| 1.2.6 以P43为启动子可自由更换信号肽载体的构建 | 第100-103页 |
| 1.2.7 pHPSQ和pHPSQR的构建 | 第103页 |
| 1.2.9 pHPSB和pHPSBR的构建 | 第103-104页 |
| 1.2.10 pHPSC和pHPSCA的构建 | 第104页 |
| 1.2.11 pHPSD和pHPSDA的构建 | 第104页 |
| 1.2.12 枯草芽孢杆菌ana-LOX重组表达载体的构建及验证 | 第104页 |
| 1.2.13 枯草杆菌感受态的制备 | 第104页 |
| 1.2.14 枯草芽孢杆菌的电转化 | 第104-105页 |
| 1.2.15 阳性重组子的鉴定 | 第105页 |
| 1.2.16 重组枯草杆菌的表达 | 第105页 |
| 1.2.17 重组脂肪酶活性的检测及SDS-PAGE分析 | 第105页 |
| 2 结果与分析 | 第105-119页 |
| 2.1 ana-LOX克隆 | 第105-106页 |
| 2.2 枯草杆菌诱导型分泌表达载体的构建及ana-LOX在WB800中的诱导表达 | 第106-110页 |
| 2.2.1 诱导型表达载体的构建 | 第106-108页 |
| 2.2.2 Ana-LOX在WB800中的诱导表达 | 第108-110页 |
| 2.3 枯草杆菌组成型分泌表达载体的构建及ana-LOX在WB800中的表达 | 第110-119页 |
| 2.3.1 组成型表达载体的构建 | 第110-115页 |
| 2.3.2 Ana-LOX在WB800中的组成型表达 | 第115-119页 |
| 3 讨论 | 第119-121页 |
| 4 本章小结 | 第121-123页 |
| 参考文献 | 第123-125页 |
| 第五章 无抗生素标记失活B.subtilis 168蛋白酶基因的研究 | 第125-151页 |
| 1 材料与方法 | 第125-136页 |
| 1.1 材料 | 第125-128页 |
| 1.1.1 菌株与质粒 | 第125-126页 |
| 1.1.2 试剂 | 第126-127页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第127页 |
| 1.1.4 培养基 | 第127-128页 |
| 1.2 方法 | 第128-136页 |
| 1.2.1 基因在大肠杆菌的亚克隆 | 第128页 |
| 1.2.2 B.subtils 168感受态的制备及转化 | 第128页 |
| 1.2.3 总体技术路线 | 第128页 |
| 1.2.4 BS-CM突变菌株的改造 | 第128-132页 |
| 1.2.5 BS-PS突变菌株的改造 | 第132-134页 |
| 1.2.6 BS-PS菌株蛋白酶失活整合载体的构建 | 第134-135页 |
| 1.2.7 SDS-PAGE | 第135-136页 |
| 2 结果与分析 | 第136-147页 |
| 2.1 BS-CM突变菌株的构建 | 第136-138页 |
| 2.2 BS-PS突变菌株的构建 | 第138-140页 |
| 2.3 LacI对BS-PS突变菌株的调控效果 | 第140-141页 |
| 2.4 BS-PS菌株aprE、nprE蛋白酶基因的无标记失活 | 第141-147页 |
| 3 讨论 | 第147-148页 |
| 4 本章小结 | 第148-149页 |
| 参考文献 | 第149-151页 |
| 全文结论 | 第151-153页 |
| 创新摘要 | 第153-155页 |
| 展望 | 第155-157页 |
| 致谢 | 第157-159页 |
| 攻读博士期间发表论文及申请专利情况 | 第159页 |
