| 摘要 | 第9-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-21页 |
| 1 炭疽杆菌疫苗 | 第13-14页 |
| 2 分泌系统 | 第14-17页 |
| 2.1 Ⅰ型分泌系统 | 第15页 |
| 2.2 ClyA分泌系统 | 第15-17页 |
| 3 减毒沙门菌及其表达外源抗原 | 第17-18页 |
| 3.1 减毒沙门菌 | 第17页 |
| 3.2 沙门菌表达外源抗原 | 第17-18页 |
| 3.2.1 质粒载体 | 第17-18页 |
| 3.2.2 通过染色体表达外源抗原 | 第18页 |
| 4 黏膜免疫刺激 | 第18页 |
| 5 佐剂 | 第18-21页 |
| 5.1 CTB和LTB | 第19页 |
| 5.2 EFn | 第19-21页 |
| 第一部分 分泌型表达载体的构建 | 第21-41页 |
| 1 材料和方法 | 第21-27页 |
| 1.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 1.1.1 质粒和菌株 | 第21-22页 |
| 1.1.2 酶与试剂 | 第22-23页 |
| 1.1.3 培养基及溶液 | 第23页 |
| 1.2 实验方法 | 第23-27页 |
| 1.2.1 PCR引物序列设计 | 第23-24页 |
| 1.2.2 PCR反应条件及体系 | 第24-26页 |
| 1.2.3 扩增产物的纯化 | 第26页 |
| 1.2.4 PCR产物克隆和感受态细胞的转化 | 第26页 |
| 1.2.5 阳性克隆的筛选 | 第26页 |
| 1.2.6 DNA测序 | 第26页 |
| 1.2.7 酶切及连接反应 | 第26页 |
| 1.2.8 超级感受态细胞的制备 | 第26-27页 |
| 1.2.9 生长曲线的测定 | 第27页 |
| 2 实验结果 | 第27-39页 |
| 2.1 构建pSA184载体 | 第27-29页 |
| 2.1.1 构建pSA184载体的过程 | 第27-28页 |
| 2.1.2 扩增目的基因和重组质粒的酶切分析 | 第28-29页 |
| 2.2 构建pSA184Pg表达载体 | 第29-31页 |
| 2.2.1 构建pSA184Pg表达载体的过程 | 第29-30页 |
| 2.2.2 扩增目的基因和重组质粒的酶切分析 | 第30-31页 |
| 2.3 构建pSA184P表达载体 | 第31-33页 |
| 2.3.1 构建pSA184P的过程 | 第31-32页 |
| 2.3.2 扩增目的基因和重组质粒的酶切分析 | 第32-33页 |
| 2.4 构建pSA184Pen表达载体 | 第33-35页 |
| 2.4.1 构建pSA184Pen表达载体过程 | 第33-34页 |
| 2.4.2 扩增目的基因和重组质粒的酶切分析 | 第34-35页 |
| 2.5 构建pSA184Pc | 第35-37页 |
| 2.5.1 构建pSA184Pc的过程 | 第35-37页 |
| 2.5.2 扩增目的基因和重组质粒的酶切分析 | 第37页 |
| 2.6 构建pSA184P1 | 第37-39页 |
| 2.6.1 构建pSA184P1的过程 | 第37-38页 |
| 2.6.2 扩增目的基因和重组质粒的酶切分析 | 第38-39页 |
| 2.7 重组菌遗传稳定性分析 | 第39页 |
| 3 讨论 | 第39-41页 |
| 第二部分 外源蛋白的表达及定位分析 | 第41-54页 |
| 第一节 外源蛋白的表达 | 第41-48页 |
| 1 实验材料和方法 | 第41-44页 |
| 1.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 1.1.1 菌株 | 第41页 |
| 1.1.2 酶与试剂 | 第41页 |
| 1.1.3 主要的仪器 | 第41页 |
| 1.1.4 溶液 | 第41-42页 |
| 1.2 实验方法 | 第42-44页 |
| 1.2.1 SDS-PAGE | 第42-43页 |
| 1.2.2 Western blot | 第43页 |
| 1.2.3 超声破碎菌体 | 第43页 |
| 1.2.4 包被G_(M1)的ELISA方法 | 第43-44页 |
| 1.2.5 荧光共聚焦观察 | 第44页 |
| 1.2.6 流式细胞术分析 | 第44页 |
| 2 实验结果 | 第44-47页 |
| 2.1 外源蛋白的Western blot分析 | 第44-45页 |
| 2.2 包被G_(M1)的ELISA分析 | 第45-46页 |
| 2.3 重组菌荧光共聚焦观察 | 第46-47页 |
| 2.4 流式细胞术分析 | 第47页 |
| 3 讨论 | 第47-48页 |
| 第二节 外源蛋白的定位分析 | 第48-54页 |
| 1 实验材料和方法 | 第48-50页 |
| 1.1 实验材料 | 第48-49页 |
| 1.1.1 菌株 | 第48-49页 |
| 1.1.2 试剂 | 第49页 |
| 1.1.3 主要的仪器 | 第49页 |
| 1.1.4 溶液 | 第49页 |
| 1.2 实验方法 | 第49-50页 |
| 1.2.1 全菌包被的ELISA分析 | 第49页 |
| 1.2.2 外膜蛋白的提取方法 | 第49-50页 |
| 1.2.3 流式细胞术分析 | 第50页 |
| 1.2.4 SDS-PAGE、Western blot | 第50页 |
| 2 实验结果 | 第50-52页 |
| 2.1 全菌包被的EILSA分析 | 第50-51页 |
| 2.2 外膜蛋白的Western blot分析 | 第51-52页 |
| 2.3 流式细胞术分析 | 第52页 |
| 3 讨论 | 第52-54页 |
| 第三部分 候选疫苗株的动物免疫评价 | 第54-69页 |
| 1 材料与方法 | 第54-61页 |
| 1.1 材料 | 第54-56页 |
| 1.1.1 菌株 | 第54页 |
| 1.1.2 试剂 | 第54-55页 |
| 1.1.3 动物及细胞 | 第55页 |
| 1.1.4 溶液 | 第55页 |
| 1.1.5 培养基的配制 | 第55页 |
| 1.1.6 主要仪器 | 第55-56页 |
| 1.2 实验方法 | 第56-61页 |
| 1.2.1 重组菌的诱导表达及蛋白纯化 | 第56-57页 |
| 1.2.2 BCA蛋白定量方法 | 第57页 |
| 1.2.3 免疫评价 | 第57-59页 |
| 1.2.4 炭疽杆菌A16R株芽孢的制备及攻毒实验 | 第59-60页 |
| 1.2.5 中和滴度测定 | 第60-61页 |
| 2 实验结果 | 第61-67页 |
| 2.1 重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第61-62页 |
| 2.2 活菌载体疫苗株的免疫学评价 | 第62-64页 |
| 2.3 炭疽杆菌A16R株芽孢的制备及攻毒实验 | 第64-66页 |
| 2.3.1 炭疽杆菌A16R株芽孢的制备 | 第64-65页 |
| 2.3.2 攻毒实验 | 第65-66页 |
| 2.4 中和滴度分析 | 第66-67页 |
| 3 讨论 | 第67-69页 |
| 参考文献 | 第69-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |