| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第12-23页 |
| 1 琼脂 | 第12页 |
| 2 琼胶酶的概述 | 第12-15页 |
| 2.1 琼胶酶的来源 | 第12-13页 |
| 2.2 琼胶酶的分类 | 第13页 |
| 2.3 检测琼胶酶活性的方法 | 第13-14页 |
| 2.4 琼胶酶的分离和纯化 | 第14-15页 |
| 3 琼胶酶酶学性质的研究 | 第15-19页 |
| 3.1 天然琼胶酶 | 第15-17页 |
| 3.2 重组琼胶酶 | 第17-19页 |
| 4 琼胶酶的应用 | 第19-21页 |
| 4.1 从琼脂糖凝胶中回收 DNA | 第19页 |
| 4.2 生产琼胶寡糖 | 第19-20页 |
| 4.3 用于海藻生物产物的研究和海藻原生质体的制备 | 第20-21页 |
| 5 本文的主要研究内容和意义 | 第21-23页 |
| 1 材料和方法 | 第23-44页 |
| 1.1 实验仪器和试剂 | 第23-24页 |
| 1.2 培养基 | 第24页 |
| 1.3 菌株和质粒 | 第24-27页 |
| 1.4 其他材料 | 第27-28页 |
| 1.5 嗜琼胶卵链菌 YM01~T琼胶酶活性分析 | 第28-32页 |
| 1.5.1 YM01~T中所有预测的琼胶酶基因的同源性分析 | 第28页 |
| 1.5.2 琼胶酶粗酶液的制备 | 第28页 |
| 1.5.3 琼胶酶粗酶液的活性检测 | 第28-30页 |
| 1.5.4 β-琼胶酶基因 YM01-3 的基因结构分析 | 第30-32页 |
| 1.6 β-琼胶酶基因 YM01-3 的克隆 | 第32-35页 |
| 1.6.1 PCR 扩增β-琼胶酶基因 YM01-3 全长序列 | 第32-33页 |
| 1.6.2 pUCm-T /YM01-3 重组质粒的构建 | 第33-34页 |
| 1.6.3 感受态细胞的制备和转化 | 第34页 |
| 1.6.4 重组质粒 pUCm-T /YM01-3 的鉴定 | 第34-35页 |
| 1.7 β-琼胶酶基因 YM01-3 的表达 | 第35-38页 |
| 1.7.1 构建重组表达质粒 pET-24a(+)/YM01-3 | 第35页 |
| 1.7.2 重组表达质粒 pET-24a(+)/YM01-3 的检验 | 第35-36页 |
| 1.7.3 琼胶酶基因 YM01-3 在工程菌中的诱导表达 | 第36-37页 |
| 1.7.4 表达蛋白的 SDS-PAGE 检测 | 第37页 |
| 1.7.5 表达蛋白的琼胶酶活性检测 | 第37-38页 |
| 1.8 重组琼胶酶的纯化 | 第38-40页 |
| 1.8.1 镍柱亲和层析法纯化蛋白 | 第38页 |
| 1.8.2 SDS-PAGE 及胶内活性检测 | 第38-39页 |
| 1.8.3 蛋白含量的测定 | 第39-40页 |
| 1.9 重组琼胶酶酶学性质研究 | 第40-44页 |
| 1.9.1 琼胶酶酶活力的测定 | 第40-41页 |
| 1.9.2 最适反应温度及温度稳定性 | 第41页 |
| 1.9.3 重组琼胶酶的热稳定性 | 第41页 |
| 1.9.4 最适反应 pH 值及 pH 稳定性 | 第41-42页 |
| 1.9.5 各种试剂对酶活力的影响 | 第42页 |
| 1.9.6 酶促反应动力学的测定 | 第42页 |
| 1.9.7 重组琼胶酶酶解琼脂糖的产物分析 | 第42-44页 |
| 2 结果 | 第44-65页 |
| 2.1 嗜琼胶卵链菌 YM01~T琼胶酶活性分析 | 第44-50页 |
| 2.1.1 YM01~T中所有预测的琼胶酶基因的同源性分析 | 第44-46页 |
| 2.1.2 SDS-PAGE、胶内活性检测及活性蛋白质谱分析结果 | 第46-47页 |
| 2.1.3 β-琼胶酶基因 YM01-3 的基因结构分析 | 第47-50页 |
| 2.2 β-琼胶酶基因 YM01-3 的克隆 | 第50-51页 |
| 2.2.1 PCR 产物回收及 pUCm-T /YM01-3 重组质粒的构建 | 第50页 |
| 2.2.2 重组质粒的测序 | 第50-51页 |
| 2.3 β-琼胶酶基因 YM01-3 的表达 | 第51-56页 |
| 2.3.1 重组表达质粒 pET-24a(+)/YM01-3 的检测 | 第51页 |
| 2.3.2 重组表达工程菌中重组质粒的检测 | 第51-52页 |
| 2.3.3 重组琼胶酶的表达结果检测 | 第52-55页 |
| 2.3.4 表达蛋白的琼胶酶活性检测 | 第55-56页 |
| 2.4 重组琼胶酶的纯化 | 第56页 |
| 2.4.1 SDS-PAGE、胶内活性检测及蛋白含量检测 | 第56页 |
| 2.5 重组琼胶酶酶学性质研究 | 第56-65页 |
| 2.5.1 最适反应温度及温度稳定性 | 第56-58页 |
| 2.5.2 重组琼胶酶的热稳定性 | 第58页 |
| 2.5.3 最适反应 pH 及 pH 稳定性 | 第58-59页 |
| 2.5.4 各种试剂对酶活力的影响 | 第59-60页 |
| 2.5.5 酶促反应动力学的测定 | 第60页 |
| 2.5.6 重组琼胶酶酶解琼脂糖的产物分析 | 第60-65页 |
| 3 讨论 | 第65-69页 |
| 4 结论与展望 | 第69-71页 |
| 结论 | 第69-70页 |
| 展望 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-79页 |
| 附录 溶液配方 | 第79-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 科研成果 | 第82-83页 |
