| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第10-21页 |
| 1 马铃薯生产概述 | 第10-11页 |
| ·中国与世界马铃薯生产发达国家比较 | 第10页 |
| ·中国马铃薯生产中存在的主要问题 | 第10-11页 |
| ·马铃薯病毒病对马铃薯生长的影响 | 第11页 |
| 2 有害生物风险分析 | 第11-14页 |
| ·有害生物与植物检疫 | 第12-13页 |
| ·有害生物风险分析定义及内容 | 第13-14页 |
| ·有害生物风险分析的定义 | 第13页 |
| ·有害生物风险分析内容 | 第13-14页 |
| 3 马铃薯病毒RT-PCR检测 | 第14-19页 |
| ·几种常见的马铃薯病毒病 | 第14-16页 |
| ·马铃薯A病毒 | 第14-15页 |
| ·马铃薯Y病毒 | 第15页 |
| ·马铃薯M病毒 | 第15页 |
| ·马铃薯S病毒 | 第15页 |
| ·马铃薯卷叶病毒 | 第15-16页 |
| ·马铃薯病毒病RT-PCR检测方法 | 第16-19页 |
| ·PCR检测技术在马铃薯病毒检测方面的应用 | 第16页 |
| ·RT-PCR的技术优点 | 第16-17页 |
| ·RT-PCR检测的影响因素和技术难点 | 第17-18页 |
| ·几种主要病毒的单重和多重RT-PCR检测研究进展 | 第18-19页 |
| ·单重RT-PCR(Multiplex-RT-PCR,m-RT-PCR)检测 | 第18页 |
| ·多重RT-PCR(Multiplex-RT-PCR,m-RT-PCR)检测 | 第18-19页 |
| ·一步法检测马铃薯病毒 | 第19页 |
| 4 实验目的及意义 | 第19-21页 |
| 第二章 加拿大进境马铃薯有害生物风险分析 | 第21-33页 |
| 1 加拿大进境马铃薯有害生物风险分析方法 | 第21-27页 |
| ·进境马铃薯上有害生物的分类 | 第21-22页 |
| ·确定马铃薯上有害生物种类 | 第21页 |
| ·确定进境马铃薯上限定的有害生物(RP)名单 | 第21-22页 |
| ·有害生物风险评估(即确定QP和RNQP名单) | 第22-27页 |
| ·风险管理阶段 | 第27页 |
| 2 加拿大进境马铃薯有害生物风险分析结果 | 第27-32页 |
| ·加拿大进境马铃薯上有害生物分类 | 第27-28页 |
| ·加拿大进境马铃薯上有害生物的确定 | 第27-28页 |
| ·限定性有害生物(RP)名单的确定 | 第28页 |
| ·加拿大进境马铃薯有害生物风险评估 | 第28-30页 |
| ·风险管理措施及效率评价 | 第30-32页 |
| ·公布QP、RNQP名单和产地检疫 | 第31页 |
| ·引进马铃薯脱毒试管苗 | 第31页 |
| ·入境检疫和隔离试种 | 第31-32页 |
| 3 试验创新及不足 | 第32-33页 |
| 第三章 RT-PCR检测马铃薯病毒 | 第33-55页 |
| 1 材料 | 第33-35页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·仪器 | 第33-34页 |
| ·常用缓冲液配方 | 第34页 |
| ·供试材料 | 第34-35页 |
| ·供试材料ELISA病毒鉴定 | 第34-35页 |
| ·材料保存 | 第35页 |
| 2 试验方法 | 第35-41页 |
| ·马铃薯病毒ssRNA的提取 | 第35-36页 |
| ·试剂盒提取植物总RNA | 第35页 |
| ·RNAiso Plus(Trizol试剂)提取植物总RNA | 第35页 |
| ·总RNA完整性检测 | 第35-36页 |
| ·马铃薯病毒RT-PCR检测方法 | 第36-41页 |
| ·马铃薯病毒引物设计以及产物扩增测序 | 第36页 |
| ·马铃薯病毒RT-PCR单重检测灵敏度测定 | 第36-37页 |
| ·马铃薯病毒RT-PCR双重检测灵敏度测定 | 第37-38页 |
| ·马铃薯三重RT-PCR检测体系优化 | 第38-41页 |
| ·马铃薯四重RT-PCR检测初探 | 第41页 |
| 3 试验结果及分析 | 第41-52页 |
| ·马铃薯卷叶病毒(PLRV)引物及RT-PCR扩增产物测序结果 | 第41-43页 |
| ·马铃薯单重检测灵敏度 | 第43-44页 |
| ·马铃薯病毒cDNA浓度稀释 | 第43页 |
| ·马铃薯单重检测灵敏度结果 | 第43-44页 |
| ·马铃薯双重检测体系验证结果及灵敏度测定结果 | 第44-47页 |
| ·马铃薯三重检测优化以及验证结果 | 第47-51页 |
| ·马铃薯病毒四重RT-PCR检测结果 | 第51-52页 |
| 4 试验创新及结果讨论 | 第52-55页 |
| ·创新 | 第52-53页 |
| ·同时适用于单重、双重及三重检测的5种病毒引物以及固定体系 | 第52-53页 |
| ·完成5种病毒所有的双重及三重检测 | 第53页 |
| ·四重病毒检测研究性进展 | 第53页 |
| ·讨论 | 第53-55页 |
| ·本试验RT-PCR技术运用于实际检测的可操作性 | 第53页 |
| ·PLRV引物设计 | 第53页 |
| ·5种病毒以下的双重、三重检测体系 | 第53-54页 |
| ·双重检测技术灵敏度 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 附录 | 第59-64页 |
