| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-12页 |
| 2 材料和方法 | 第12-23页 |
| 2.1 试验材料 | 第12-13页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第12页 |
| 2.1.2 试剂及其配制 | 第12页 |
| 2.1.3 培养基 | 第12-13页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第13页 |
| 2.2 STMR1 基因的克隆及生物信息学分析 | 第13-15页 |
| 2.2.1 StMR1 基因的查询 | 第13页 |
| 2.2.2 玉米大斑病菌基因组 DNA 的提取 | 第13-14页 |
| 2.2.3 StMR1 基因全长的 PCR 扩增及测序 | 第14-15页 |
| 2.2.4 StMR1 基因的生物信息学分析 | 第15页 |
| 2.3 STMR1 基因 RNAI 载体的构建及 RNAI 转化子的获得 | 第15-20页 |
| 2.3.1 StMR1 基因片段的 PCR 扩增 | 第15页 |
| 2.3.2 PCR 扩增产物的回收、连接 | 第15-16页 |
| 2.3.3 连接产物的克隆及测序 | 第16-17页 |
| 2.3.4 目的片段与目标载体的连接 | 第17-18页 |
| 2.3.5 玉米大斑病菌的原生质体转化 | 第18页 |
| 2.3.6 RNAi 转化子的筛选 | 第18-19页 |
| 2.3.7 RNAi 转化子的 PCR 验证 | 第19页 |
| 2.3.8 RNAi 转化子总 RNA 的提取及纯化 | 第19页 |
| 2.3.9 反转录体系及第一链 cDNA 的合成 | 第19-20页 |
| 2.3.10 RNAi 转化子 StMR1 基因表达量分析 | 第20页 |
| 2.3.11 转化子表型分析及菌丝形态的显微观察 | 第20页 |
| 2.4 STMR1 基因敲除载体的构建 | 第20-23页 |
| 2.4.1 同源片段的 PCR 扩增 | 第20-21页 |
| 2.4.2 PCR 产物的回收、连接 | 第21页 |
| 2.4.3 同源片段连接产物的克隆及测序 | 第21页 |
| 2.4.4 同源片段与目标载体的连接 | 第21-23页 |
| 3 结果与分析 | 第23-36页 |
| 3.1 STMR1 基因的克隆及生物信息学分析 | 第23-29页 |
| 3.1.1 StMR1 基因的查询与克隆 | 第23页 |
| 3.1.2 StMR1 基因的同源性分析 | 第23-24页 |
| 3.1.3 StMR1 基因编码蛋白的聚类分析与多序列比对 | 第24-28页 |
| 3.1.4 StMR1 基因编码蛋白的保守结构域分析 | 第28-29页 |
| 3.2 STMR1 基因 RNAI 载体构建及转化子分析 | 第29-33页 |
| 3.2.1 StMR1 基因同源片段的克隆 | 第29页 |
| 3.2.2 目的片段的连接 | 第29-30页 |
| 3.2.3 重组载体的酶切验证 | 第30页 |
| 3.2.4 RNAi 阳性转化子的获得 | 第30-31页 |
| 3.2.5 RNAi 转化子的 PCR 验证 | 第31页 |
| 3.2.6 RNAi 转化子的基因表达量分析 | 第31-32页 |
| 3.2.7 RNAi 转化子的形态学特征观察 | 第32页 |
| 3.2.8 RNAi 转化子菌丝的显微观察 | 第32-33页 |
| 3.3 STMR1 基因同源重组载体构建 | 第33-36页 |
| 3.3.1 StMR1 基因同源片段的克隆 | 第33-34页 |
| 3.3.2 StMR1 基因敲除片段的酶切验证 | 第34页 |
| 3.3.3 StMR1 基因敲除载体的酶切验证 | 第34-35页 |
| 3.3.4 重组 DNA 片段的获得 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-39页 |
| 4.1 STMR1 基因与黑色素合成的关系 | 第36-37页 |
| 4.2 RNAI 技术与基因敲除技术的优缺点比较 | 第37页 |
| 4.3 PEG 介导原生质体转化法 | 第37-39页 |
| 5 结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-44页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第44-45页 |
| 作者简历 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-47页 |
