| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第10-21页 |
| 1.1 体细胞核移植技术概况 | 第10-11页 |
| 1.1.1 体细胞核移植技术 | 第10页 |
| 1.1.2 体细胞核移植存在的问题 | 第10页 |
| 1.1.3 体细胞核移植与表观重编程 | 第10-11页 |
| 1.2 基因组印记研究进展 | 第11-13页 |
| 1.2.1 基因组印记及其发现 | 第11页 |
| 1.2.2 印记基因的特征 | 第11-13页 |
| 1.3 主要研究方法 | 第13-18页 |
| 1.3.1 DNA 甲基化技术 | 第13-17页 |
| 1.3.2 PCR-SSCP 技术 | 第17-18页 |
| 1.4 所研究的基因 | 第18-20页 |
| 1.4.1 DLK1-DIO3 印记区域研究现状 | 第18-20页 |
| 1.4.2 PEG11 基因研究现状 | 第20页 |
| 1.5 研究内容及意义 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-35页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 获取牛组织样本 | 第21页 |
| 2.1.2 实验药品 | 第21页 |
| 2.1.3 试剂配制 | 第21-23页 |
| 2.1.4 主要仪器及设备 | 第23-24页 |
| 2.1.5 生物信息学网站和分析软件 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-35页 |
| 2.2.1 牛 PEG11 基因生物信息学分析 | 第24页 |
| 2.2.2 牛待测组织总 RNA 的提取及检测 | 第24-25页 |
| 2.2.3 反转录合成 cDNA | 第25页 |
| 2.2.4 基因组织特异性表达的 RT-PCR 分析 | 第25-27页 |
| 2.2.5 牛肺脏基因组 DNA 的提取及检测 | 第27-29页 |
| 2.2.6 牛 PEG11 基因杂合子个体筛选 | 第29-30页 |
| 2.2.7 牛 PEG11 基因印记状态分析 | 第30页 |
| 2.2.8 PEG11 基因等位基因特异的甲基化状态分析 | 第30-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-43页 |
| 3.1 牛 PEG11 基因生物信息分析 | 第35-36页 |
| 3.2 牛各组织总 RNA 的检测结果 | 第36页 |
| 3.3 基因组织特异性表达的 RT-PCR 分析 | 第36-37页 |
| 3.4 牛肺脏基因组 DNA 的检测 | 第37页 |
| 3.5 筛选牛 PEG11 基因杂合子个体 | 第37-38页 |
| 3.6 牛 PEG11 基因印记状态分析 | 第38-39页 |
| 3.6.1 杂合子个体待检测组织 RNA 提取及 RT-PCR 反应 | 第38-39页 |
| 3.6.2 等位基因特异表达分析 | 第39页 |
| 3.7 牛 PEG11 基因甲基化状态分析 | 第39-43页 |
| 3.7.1 CG 岛预测 | 第39-40页 |
| 3.7.2 BSP-PCR 引物设计 | 第40页 |
| 3.7.3 巢式 PCR 扩增 | 第40-41页 |
| 3.7.4 序列比对 | 第41-43页 |
| 4 讨论 | 第43-45页 |
| 4.1 牛 PEG11 基因序列生物信息学分析 | 第43页 |
| 4.2 牛 PEG11 基因的组织特异性表达分析 | 第43页 |
| 4.3 PEG11 基因印记状态及 DNA 甲基化状态在体细胞核移植牛的重编程 | 第43-45页 |
| 5 结论 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 在读期间发表论文 | 第52-53页 |
| 作者简介 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
