| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-10页 |
| 符号说明 | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-33页 |
| ·花粉管通道法研究进展 | 第11-19页 |
| ·花粉管通道法转基因技术的提出 | 第11-12页 |
| ·花粉管通道法的分子验证及发展 | 第12-15页 |
| ·花粉管通道法的操作程序 | 第15-17页 |
| ·外源DNA的制备 | 第15-16页 |
| ·确定导入外源DNA的时间 | 第16页 |
| ·外源DNA的导入 | 第16-17页 |
| ·影响花粉管通道法转化效率的因素 | 第17-18页 |
| ·外源DNA的片段大小、纯度和浓度 | 第18页 |
| ·受体与供体的亲缘关系 | 第18页 |
| ·花粉管通道法转基因技术的优势与问题 | 第18-19页 |
| ·花粉管通道法转基因技术的优点 | 第18-19页 |
| ·花粉管通道法存在的问题 | 第19页 |
| ·甜瓜基因工程研究进展 | 第19-23页 |
| ·甜瓜组织培养研究 | 第20页 |
| ·甜瓜转基因研究 | 第20-23页 |
| ·甜瓜抗病基因工程 | 第21-22页 |
| ·甜瓜抗虫基因工程 | 第22页 |
| ·甜瓜耐盐基因工程 | 第22页 |
| ·甜瓜耐贮藏基因工程 | 第22-23页 |
| ·核基质附着区研究概况 | 第23-24页 |
| ·转基因植物检测方法概述 | 第24-32页 |
| ·外源基因整合水平检测 | 第25-26页 |
| ·PCR检测 | 第25页 |
| ·Southern blot检测 | 第25-26页 |
| ·外源基因转录水平检测 | 第26-27页 |
| ·Northern blot检测 | 第26页 |
| ·RT-PCR检测 | 第26-27页 |
| ·外源基因表达水平检测 | 第27-30页 |
| ·ELISA检测 | 第27-28页 |
| ·Western blot检测 | 第28页 |
| ·组织化学染色检测 | 第28-29页 |
| ·荧光显微检测 | 第29页 |
| ·抗生素检测 | 第29-30页 |
| ·转基因植物检测的其他技术 | 第30-31页 |
| ·RFLP分析 | 第30页 |
| ·RAPD分析 | 第30-31页 |
| ·生物芯片技术 | 第31页 |
| ·转基因植物检测技术评价 | 第31-32页 |
| ·研究目的及意义 | 第32-33页 |
| 第二章 材料与方法 | 第33-48页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·植物材料 | 第33页 |
| ·菌种与质粒 | 第33页 |
| ·主要生化试剂 | 第33页 |
| ·引物 | 第33-34页 |
| ·克隆目的基因的引物 | 第33-34页 |
| ·检测引物 | 第34页 |
| ·方法 | 第34-48页 |
| ·aacCl基因和nptⅡ基因的克隆 | 第34-37页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增获得aacCl基因和nptⅡ基因片段 | 第35-36页 |
| ·PCR产物纯化 | 第36页 |
| ·双酶切aacCl基因和nptⅡ基因片段 | 第36-37页 |
| ·表达载体构建 | 第37-41页 |
| ·酶切质粒DNA | 第37-38页 |
| ·连接反应 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第39-40页 |
| ·转化子的筛选 | 第40-41页 |
| ·双酶切鉴定重组质粒 | 第41页 |
| ·导入液的制备 | 第41-42页 |
| ·表达载体质粒DNA的制备 | 第41页 |
| ·NheI酶切pPZP200(35S-nptⅡ-NOS)和pPZP200(35S-aacCl-NOS) | 第41-42页 |
| ·检测质粒DNA浓度 | 第42页 |
| ·制备导入液 | 第42页 |
| ·花粉管通道法转化河套蜜瓜 | 第42-44页 |
| ·自花授粉 | 第42-43页 |
| ·导入时间与方法 | 第43-44页 |
| ·收获与统计 | 第44页 |
| ·叶片涂抹法筛选抗性植株 | 第44-48页 |
| ·Kan和Gen最佳筛选浓度的确定 | 第44-45页 |
| ·T_0代植株的抗性鉴定 | 第45-48页 |
| 第三章 结果与分析 | 第48-60页 |
| ·aacCl基因和nptⅡ基因的克隆 | 第48-49页 |
| ·质粒DNA的制备 | 第48页 |
| ·PCR扩增获得aacCl基因和nptⅡ基因片段 | 第48-49页 |
| ·表达载体构建 | 第49-52页 |
| ·酶切质粒DNA | 第49页 |
| ·转化子的筛选 | 第49-50页 |
| ·菌体PCR检测重组质粒 | 第50-51页 |
| ·双酶切鉴定重组质粒 | 第51-52页 |
| ·导入液的制备 | 第52-53页 |
| ·重组质粒DNA的提取 | 第52页 |
| ·NheI酶切pPZP200(35S-nptⅡ-NOS)和pPZP200(35S-aacCl-NOS) | 第52页 |
| ·检测质粒DNA浓度 | 第52-53页 |
| ·花粉管通道法转化的河套蜜瓜收获与统计 | 第53-55页 |
| ·结果率统计 | 第53页 |
| ·种子统计 | 第53-55页 |
| ·最佳抗生素筛选浓度的确定 | 第55-56页 |
| ·河套蜜瓜基因组DNA的提取 | 第56-57页 |
| ·T_0代抗性植株的PCR检测 | 第57-58页 |
| ·转基因植株的检测 | 第58-60页 |
| ·两种质粒混合导入获得植株的检测结果 | 第58页 |
| ·不同时间导入获得种子的检测结果 | 第58-59页 |
| ·不同浓度质粒溶液导入获得种子的检测结果 | 第59页 |
| ·不同方法处理柱头导入获得种子的检测结果 | 第59-60页 |
| 第四章 讨论 | 第60-62页 |
| ·外源DNA的分子结构 | 第60页 |
| ·核基质附着区序列 | 第60页 |
| ·导入时间 | 第60-61页 |
| ·外源DNA浓度 | 第61页 |
| ·柱头处理方法 | 第61-62页 |
| 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-70页 |
| 附录 | 第70-76页 |
| 致谢 | 第76页 |