| 英文缩略词及中文对照表 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-21页 |
| 1.1 生防芽孢杆菌的研究现状 | 第12-13页 |
| 1.2 生物膜 | 第13-16页 |
| 1.2.1 细菌生物膜的概念 | 第13页 |
| 1.2.2 细菌生物膜的形成过程 | 第13-14页 |
| 1.2.3 细菌生物膜形成的调控基因 | 第14-15页 |
| 1.2.4 细菌生物膜研究现状 | 第15-16页 |
| 1.3 抗菌活性 | 第16-18页 |
| 1.3.1 抗菌活性物质简介 | 第16-17页 |
| 1.3.2 芽孢杆菌生物膜形成与抗菌活性的关系 | 第17-18页 |
| 1.4 sinI研究进展 | 第18-20页 |
| 1.5 基因打靶技术 | 第20-21页 |
| 1.5.1 同源重组技术 | 第20页 |
| 1.5.2 结合反向筛选标记的两步单交换同源重组 | 第20-21页 |
| 2 材料与方法 | 第21-34页 |
| 2.1 材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 溶液与培养基配制 | 第21-23页 |
| 2.1.2.1 溶液配制 | 第21-22页 |
| 2.1.2.2 培养基配制 | 第22-23页 |
| 2.1.3 仪器与试剂 | 第23页 |
| 2.1.3.1 主要仪器 | 第23页 |
| 2.1.3.2 生化及分子生物学试剂 | 第23页 |
| 2.2 方法 | 第23-34页 |
| 2.2.1 sinI基因缺失突变株的初步构建 | 第23-31页 |
| 2.2.1.1 sinI基因缺失突变株构建方法设计 | 第23-24页 |
| 2.2.1.2 序列分析 | 第24页 |
| 2.2.1.3 突变引物设计 | 第24-25页 |
| 2.2.1.4 sinI同源前、后臂的PCR扩增 | 第25-26页 |
| 2.2.1.5 同源前臂sinIF与同源后臂sinIR的连接 | 第26-27页 |
| 2.2.1.6 sinIF-sinIR与pMD18-T连接 | 第27页 |
| 2.2.1.7 sinIF-sinIR-pMD18-T的转化及验证 | 第27-28页 |
| 2.2.1.8 sinIF-sinIR的重组质粒和自杀质粒pK18mobsacB的提取 | 第28-29页 |
| 2.2.1.9 sinIF-sinIR-pMD18-T与pK18mobsacB质粒的双酶切 | 第29页 |
| 2.2.1.10 sinIF-sinIR-pMD18-T重组质粒与pK18mobsacB质粒的双酶切产物的连接 | 第29页 |
| 2.2.1.11 sinIF-sinIR-pK18mobsacB转化E. coli T1及验证 | 第29页 |
| 2.2.1.12 sinIF-sinIR-pK18mobsacB重组质粒的提取及验证 | 第29-30页 |
| 2.2.1.13 B.amyloliquefaciens PEBA20感受态的制备 | 第30页 |
| 2.2.1.14 sinIF-sinIR-pK18mobsacB质粒电转化 | 第30页 |
| 2.2.1.15 卡那筛选获得第一次重组的B.amyloliquefaciens PEBA20菌体 | 第30-31页 |
| 2.2.1.16 蔗糖筛选获得第二次重组的B.amyloliquefaciens PEBA20菌体 | 第31页 |
| 2.2.1.17 二次重组PEBA20菌体验证 | 第31页 |
| 2.2.2 B.amyloliquefaciens PEBA20△sinI突变株簇动性表型测定 | 第31页 |
| 2.2.3 B.amyloliquefaciens PEBA20△sinI突变株生物膜表型测定 | 第31-32页 |
| 2.2.3.1 △sinI突变株固气界面生物膜表型测定 | 第31页 |
| 2.2.3.2 △sinI突变株液气界面生物膜表型测定 | 第31-32页 |
| 2.2.4 B.amyloliquefaciens PEBA20△sinI突变株抑菌活性的测定 | 第32-33页 |
| 2.2.4.1 指示真菌和指示细菌的培养 | 第32页 |
| 2.2.4.2 野生株和△sinI突变株无菌发酵滤液的制备 | 第32页 |
| 2.2.4.3 △sinI突变株对苹果腐烂病菌、轮纹病菌、炭疽病菌的抑制作用测定 | 第32-33页 |
| 2.2.4.3.1 △sinI突变株菌活体对苹果腐烂病菌、轮纹病菌、炭疽病菌的抑制作用测定 | 第32页 |
| 2.2.4.3.2 △sinI突变株发酵滤液对苹果腐烂病菌、轮纹病菌、炭疽病菌抑菌作用测定 | 第32-33页 |
| 2.2.4.4 △sinI突变株发酵液抑菌活性的测定 | 第33页 |
| 2.2.4.4.1 △sinI突变株发酵滤液对杨树溃疡病菌、小麦纹枯病菌、玉米小斑病菌抑菌活性的测定 | 第33页 |
| 2.2.4.4.2 △sinI突变株发酵滤液对马铃薯环腐病菌、烟草青枯病菌、大白菜软腐病菌抑菌活性的测定 | 第33页 |
| 2.2.4.5 △sinI突变株菌活体抑菌活性的检测 | 第33页 |
| 2.2.5 B.amyloliquefaciens PEBA20△sinI突变株生长曲线测定 | 第33-34页 |
| 2.2.6 B.amyloliquefaciens PEBA20△sinI突变株芽孢特征测定 | 第34页 |
| 2.2.7 B.amyloliquefaciens PEBA20△sinI突变株菌体形态测定 | 第34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-56页 |
| 3.1 B.amyloliquefaciens PEBA20△sinI突变株的构建 | 第34-39页 |
| 3.1.1 同源前臂sinIF与同源后臂sinIR的PCR扩增 | 第34-35页 |
| 3.1.2 同源前臂sinIF与同源后臂sinIR的连接及连接产物的克隆 | 第35页 |
| 3.1.3 重组质粒sinIF-sinIR-pMD 18-T和自杀质粒pK18mobsacB的提取与双酶切 | 第35-36页 |
| 3.1.4 sinIF-sinIR与pK18mobsacB酶切产物的连接及重组质粒的克隆 | 第36页 |
| 3.1.5 sinIF-sinIR-pK18mobsacB重组质粒的提取及验证 | 第36-37页 |
| 3.1.6 sinI基因缺失突变株的筛选 | 第37-38页 |
| 3.1.7 sinI基因序列分析 | 第38-39页 |
| 3.2 B.amyloliquefaciens PEBA20△sinI突变株的簇动性表型 | 第39-41页 |
| 3.3 B.amyloliquefaciens PEBA20△sinI突变株的生物膜表型 | 第41-45页 |
| 3.3.1 △sinI突变株固气界面生物膜的表型 | 第41-43页 |
| 3.3.2 △sinI突变株液气界面生物膜的表型 | 第43-45页 |
| 3.4 B.amyloliquefaciens PEBA20△sinI突变株的抑菌活性 | 第45-53页 |
| 3.4.1 △sinI突变株对苹果腐烂病菌、轮纹病菌、炭疽病菌的抑菌活性 | 第45-49页 |
| 3.4.1.1 △sinI突变株菌活体对苹果腐烂病菌、轮纹病菌、炭疽病菌的抑菌作用 | 第45-46页 |
| 3.4.1.2 野生株菌活体对苹果腐烂病菌、轮纹病菌、炭疽病菌菌丝形态的致畸作用 | 第46-47页 |
| 3.4.1.3 △sinI突变株发酵滤液对苹果腐烂病病菌、轮纹病菌、炭疽病菌的抑菌作用 | 第47-49页 |
| 3.4.2 △sinI突变株发酵液的抑菌活性 | 第49-52页 |
| 3.4.2.1 △sinI突变株发酵液对杨树溃疡病菌、小麦纹枯病菌、玉米小斑病菌的抑菌作用 | 第49-51页 |
| 3.4.2.2 △sinI突变株发酵液对马铃薯环腐病菌、烟草青枯病菌、白菜软腐病菌的抑菌作用 | 第51-52页 |
| 3.4.3 △sinI突变株菌活体的抑菌活性 | 第52-53页 |
| 3.5 B amyloliquefaciens PEBA20△sinI突变株的生长曲线 | 第53-54页 |
| 3.6 B.amyloliquefaciens PEBA20△sinI突变株的芽孢、菌体特征 | 第54-56页 |
| 4 讨论 | 第56-60页 |
| 4.1 B.amyloliquefaciens PEBA20△sinI突变株的构建 | 第56-57页 |
| 4.1.1 sinI基因的确定 | 第56页 |
| 4.1.2 重叠延伸PCR | 第56页 |
| 4.1.3 外源DNA导入宿主细胞 | 第56-57页 |
| 4.1.4 转化子筛选和鉴定 | 第57页 |
| 4.2 B.amyloliquefaciens PEBA20△sinI突变株的部分特征测定 | 第57-60页 |
| 4.2.1 △sinI突变株生物膜形成检测 | 第57页 |
| 4.2.2 △sinI突变株的抑菌活性检测 | 第57-58页 |
| 4.2.3 △sinI突变株生长曲线及芽孢菌体检测 | 第58-60页 |
| 5 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-70页 |
| 附录 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第72页 |
