| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 中英文对照表 | 第9-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-18页 |
| 1.1 CD20单克隆抗体概述 | 第13页 |
| 1.2 应用和挑战 | 第13-14页 |
| 1.3 实验设计思路 | 第14-18页 |
| 第2章 材料与试剂 | 第18-20页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-19页 |
| 2.2 主要器材和实验仪器 | 第19-20页 |
| 第３章 实验方法 | 第20-56页 |
| 3.1 抗CD20单抗基因合成 | 第20-22页 |
| 3.2 PREA202表达载体的构建 | 第22-27页 |
| 3.2.1 PCR克隆dhfr基因表达单元 | 第22-23页 |
| 3.2.2 dhfr表达单元PCR产物及pCDNA3.5(+)载体双酶切 | 第23-24页 |
| 3.2.3 酶切片段的胶回收 | 第24页 |
| 3.2.4 连接及转化及克隆筛选 | 第24-27页 |
| 3.3 PREA202/REA202H表达载体的构建 | 第27-30页 |
| 3.3.1 抗CD20单抗的重链和pREA202载体酶切片段的制备 | 第27-28页 |
| 3.3.2 双酶切重链片段和pREA202载体的连接转化和克隆鉴定 | 第28-30页 |
| 3.4 PREA202/REA202L表达载体的构建 | 第30-32页 |
| 3.4.1 抗CD20单抗的轻链和pREA202载体酶切片段的制备 | 第30页 |
| 3.4.2 双酶切轻链片段和pREA202载体的连接转化和克隆鉴定 | 第30-32页 |
| 3.5 表达REA202蛋白的工程细胞株的构建 | 第32-35页 |
| 3.5.1 细胞复苏 | 第34页 |
| 3.5.2 细胞培养和扩增传代 | 第34页 |
| 3.5.3 实验方法 | 第34页 |
| 3.5.4 实验结果 | 第34-35页 |
| 3.6 细胞接种密度考察 | 第35-36页 |
| 3.6.1 细胞复苏 | 第35页 |
| 3.6.2 细胞培养和扩增传代 | 第35页 |
| 3.6.3 实验方法 | 第35页 |
| 3.6.4 实验结果 | 第35-36页 |
| 3.7 培养温度 | 第36-37页 |
| 3.7.1 细胞复苏 | 第36页 |
| 3.7.2 细胞培养和扩增传代 | 第36页 |
| 3.7.3 实验方法 | 第36页 |
| 3.7.4 实验结果 | 第36-37页 |
| 3.8 表达REA202蛋白的工程细胞株的构建 | 第37-53页 |
| 3.8.1 pBF01/REA202H和pBF01/REA202L质粒线性化 | 第38页 |
| 3.8.2 共转染CHO-DG44细胞 | 第38-39页 |
| 3.8.3 阳性克隆筛选 | 第39-40页 |
| 3.8.4 MTX加压筛选 | 第40-41页 |
| 3.8.5 工程细胞株的初步鉴定 | 第41-52页 |
| 3.8.7 表达产物鉴别 | 第52-53页 |
| 3.9 原始细胞库、主细胞库、工作细胞库的建立 | 第53-54页 |
| 3.9.1 原始细胞库的建立 | 第53-54页 |
| 3.10 主细胞库的建立 | 第54页 |
| 3.13 细胞库的考察和检定 | 第54页 |
| 3.14 细胞库细胞复苏率考察 | 第54-55页 |
| 3.15 细胞库细胞形态学考察 | 第55页 |
| 3.16 细胞倍增时间考察 | 第55页 |
| 3.17 REA202WCB20111228工作细胞库的检定 | 第55-56页 |
| 第4章 结果分析与讨论 | 第56-58页 |
| 第5章 结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
