| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第12-25页 |
| 1.1 米曲霉的遗传改造及表型研究 | 第12-17页 |
| 1.1.1 米曲霉的形态与分类 | 第12-13页 |
| 1.1.2 米曲霉遗传改造 | 第13-15页 |
| 1.1.3 米曲霉表型研究的意义 | 第15-17页 |
| 1.2 表型相关基因的研究 | 第17-22页 |
| 1.2.1 Rho GTPase家族基因 | 第17-21页 |
| 1.2.2 研究中的几个影响表型的基因 | 第21-22页 |
| 1.3 课题的立题依据 | 第22-23页 |
| 1.4 课题的主要研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 米曲霉菌株6个Rho家族基因敲除载体的构建及表型分析 | 第25-69页 |
| 2.1 引言 | 第25-26页 |
| 2.2 实验材料与设备 | 第26-33页 |
| 2.2.1 质粒与菌种 | 第26-27页 |
| 2.2.2 主要实验材料 | 第27-30页 |
| 2.2.4 引物设计 | 第30-33页 |
| 2.3 实验方法 | 第33-45页 |
| 2.3.1 重叠PCR构建6个Rho家族基因敲除框 | 第33-38页 |
| 2.3.2 Rho家族基因敲除框连接T载体后转化大肠杆菌扩增 | 第38-40页 |
| 2.3.3 Rho家族基因敲除质粒小量提取及酶切验证 | 第40-41页 |
| 2.3.4 Rho家族基因敲除质粒大量提取及线性化处理 | 第41-42页 |
| 2.3.5 米曲霉4177的转化及Rho家族基因敲除转化子的筛选 | 第42-43页 |
| 2.3.6Rho家族基因敲除疑似转化子基因组的提取及PCR验证 | 第43-45页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第45-67页 |
| 2.4.1 米曲霉4177中Rho家族基因及氨基酸序列简要分析 | 第45-46页 |
| 2.4.2 Rho家族基因RacA敲除载体的构建 | 第46-48页 |
| 2.4.3 Rho家族基因CftA敲除载体的构建 | 第48-49页 |
| 2.4.4 Rho家族基因Rho1敲除载体的构建 | 第49-51页 |
| 2.4.5 Rho家族基因Rho2敲除载体的构建 | 第51-53页 |
| 2.4.6 Rho家族基因Rho3敲除载体的构建 | 第53-54页 |
| 2.4.7 Rho家族基因Rho4敲除载体的构建 | 第54-56页 |
| 2.4.8 Rho家族基因敲除转化结果 | 第56-67页 |
| 2.5 本章小结 | 第67-69页 |
| 第三章 米曲霉4177菌株6个Rho家族基因缺陷型及几个与表型相关基因缺陷型的表型分析 | 第69-90页 |
| 3.1 引言 | 第69页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第69-73页 |
| 3.2.1 质粒与菌种 | 第69-70页 |
| 3.2.2 主要实验材料 | 第70-73页 |
| 3.3 实验方法 | 第73-75页 |
| 3.3.1 米曲霉菌体的培养 | 第73页 |
| 3.3.1.1 大肠杆菌培养 | 第73页 |
| 3.3.2 米曲霉突变菌株孢子悬液的制备与定量 | 第73页 |
| 3.3.3 米曲霉突变菌株干重及生长曲线的测定 | 第73-74页 |
| 3.3.4 米曲霉突变菌株液体的表型分析 | 第74页 |
| 3.3.5 米曲霉突变菌株固体的表型分析 | 第74-75页 |
| 3.3.5.1 米曲霉突变菌株碳源平板表型分析 | 第74页 |
| 3.3.5.2 米曲霉突变菌株CD刚果红平板表型分析 | 第74页 |
| 3.3.5.3 米曲霉突变菌株CD荧光增白剂平板表型分析 | 第74页 |
| 3.3.5.4 米曲霉突变菌株氧化压力CD平板表型分析 | 第74-75页 |
| 3.3.5.5 米曲霉突变菌株CD-Ca2+平板表型分析 | 第75页 |
| 3.3.5.6 米曲霉突变菌株CD-NaCl平板表型分析 | 第75页 |
| 3.3.6 米曲霉突变菌株显微观察 | 第75页 |
| 3.3.6.1 共聚焦显微镜观察米曲霉突变型菌丝及菌丝顶端 | 第75页 |
| 3.3.6.2 场发射扫描电镜观察米曲霉突变型菌丝及菌丝顶端 | 第75页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第75-89页 |
| 3.4.1 Rho家族基因及表型相关基因缺陷基因敲除菌株干重及生长曲线的测定结果 | 第76-79页 |
| 3.4.2 Rho家族基因及表型相关基因缺陷基因敲除菌株液态培养基培养及表型分析 | 第79-81页 |
| 3.4.3 Rho家族基因及表型相关基因缺陷基因敲除株固体培养基培养及表型分析 | 第81-85页 |
| 3.4.4 Rho家族基因缺陷基因敲除菌株显微观察 | 第85-89页 |
| 3.5 本章小结 | 第89-90页 |
| 第四章 米曲霉4177中碱性淀粉酶基因AmyB、AmyC中性蛋白酶基因AlpA的连续敲除 | 第90-111页 |
| 4.1 引言 | 第90页 |
| 4.2 实验材料和设备 | 第90-94页 |
| 4.2.1 质粒与菌种 | 第90-91页 |
| 4.2.2 主要实验材料 | 第91页 |
| 4.2.3 引物序列 | 第91-94页 |
| 4.3 实验方法 | 第94-97页 |
| 4.3.1 重叠PCR构建AmyB、AlpA及AmyC基因敲除框 | 第94-95页 |
| 4.3.2 AmyB、AlpA及AmyC基因敲除框连接T载体后转化大肠杆菌Match1T1进行扩增 | 第95页 |
| 4.3.3 AmyB、AlpA及AmyC基因敲除质粒小量提取及酶切验证 | 第95页 |
| 4.3.4 AmyB、AlpA及AmyC基因敲除质粒大量提取及线性化处理 | 第95页 |
| 4.3.5 米曲霉4177的转化和AmyB、AlpA及AmyC基因敲除转化子的筛选 | 第95页 |
| 4.3.6 AmyB、AlpA及AmyC基因敲除疑似转化子基因组的提取及PCR验证 | 第95-96页 |
| 4.3.7 筛选标记基因ANpyrG的去除 | 第96-97页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第97-109页 |
| 4.4.1 碱性淀粉酶基因AmyB敲除载体的构建 | 第97-99页 |
| 4.4.2 中性蛋白酶基因AlpA敲除载体的构建 | 第99-101页 |
| 4.4.3 碱性淀粉酶基因AmyC敲除载体的构建 | 第101-103页 |
| 4.4.4 碱性淀粉酶基因AmyB、AmyC中性蛋白酶基因AlpA敲除株的构建表型分析及敲除株筛选标记基因ANpyrG的去除 | 第103-109页 |
| 4.5 本章小结 | 第109-111页 |
| 结论与展望 | 第111-113页 |
| 结论 | 第111-112页 |
| 展望 | 第112-113页 |
| 参考文献 | 第113-118页 |
| 校对报告 | 第118-119页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第119-120页 |
| 致谢 | 第120-121页 |
| 附件 | 第121页 |
