| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-28页 |
| ·PQQ的发现 | 第16页 |
| ·PQQ的物理性质 | 第16-17页 |
| ·PQQ的分布 | 第17-18页 |
| ·PQQ的生物学功能 | 第18-19页 |
| ·PQQ作为醌蛋白的辅酶，参与呼吸链的电子传递 | 第18页 |
| ·PQQ是机体生长刺激因子 | 第18页 |
| ·调节机体自由基水平，保护机体 | 第18-19页 |
| ·促进神经生长因子产生，修复神经生长因子 | 第19页 |
| ·PQQ的生物合成 | 第19-21页 |
| ·PQQ的合成基因 | 第21-24页 |
| ·pqqA | 第22页 |
| ·pqqB | 第22-23页 |
| ·pqqC和pqqD | 第23页 |
| ·pqqE | 第23-24页 |
| ·pqqF和pqqG | 第24页 |
| ·PQQ生物合成的调控 | 第24-25页 |
| ·PQQGDH的介绍 | 第25-26页 |
| ·本课题的立项意义 | 第26-28页 |
| 第二章 克隆肺炎克雷伯氏菌PQQ基因并构建工程质粒 | 第28-46页 |
| ·引言 | 第28页 |
| ·实验材料 | 第28-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第28页 |
| ·试剂与仪器 | 第28-29页 |
| ·培养基 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-40页 |
| ·肺炎克雷伯氏杆菌肺炎亚种基因组DNA的提取 | 第29-30页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)扩增pqq 2K片段 | 第30-31页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳鉴定目的基因pqq 2K片段并回收 | 第31页 |
| ·pET-28a质粒载体的提取 | 第31-32页 |
| ·酶切连接构建质粒Ⅰ(pET28a-2K) | 第32-33页 |
| ·转化 | 第33-34页 |
| ·菌落PCR筛选阳性克隆 | 第34页 |
| ·质粒Ⅰ(pET28a-2K)的酶切鉴定 | 第34-35页 |
| ·PCR扩增pqq 5K片段 | 第35-37页 |
| ·质粒Ⅰ(pET28a-2K)和5K DNA片段的酶切连接及转化 | 第37-38页 |
| ·菌落PCR筛选阳性克隆 | 第38-40页 |
| ·转化大肠杆菌BL21 | 第40页 |
| ·结果与讨论 | 第40-45页 |
| ·K. pneumoniae subsp.pneumoniae基因组DNA的提取 | 第40-41页 |
| ·PQQ 2K片段PCR扩增 | 第41页 |
| ·pET28a质粒提取 | 第41-42页 |
| ·酶切连接后转化 | 第42页 |
| ·2K片段菌落PCR | 第42-43页 |
| ·5K片段PCR扩增 | 第43页 |
| ·连接转化后菌落PCR | 第43-44页 |
| ·提取质粒单、双酶切鉴定 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第三章 工程菌表达PQQ的研究 | 第46-52页 |
| ·引言 | 第46页 |
| ·实验材料 | 第46-47页 |
| ·菌株与质粒 | 第46-47页 |
| ·试剂与仪器 | 第47页 |
| ·培养基 | 第47页 |
| ·实验方法 | 第47-48页 |
| ·工程菌诱导表达PQQ | 第47-48页 |
| ·非酶系统测定PQQ含量 | 第48页 |
| ·基本培养基发酵生产PQQ | 第48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-50页 |
| ·工程菌生成PQQ的检测 | 第48-49页 |
| ·基本培养基发酵生产PQQ的检测 | 第49-50页 |
| ·本章小结 | 第50-52页 |
| 第四章 克隆大肠杆菌gcd基因并构建工程质粒 | 第52-64页 |
| ·引言 | 第52页 |
| ·实验材料 | 第52-53页 |
| ·菌株与质粒 | 第52页 |
| ·试剂与仪器 | 第52-53页 |
| ·培养基 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-59页 |
| ·Escherichia coli BL21基因组DNA的提取 | 第53-54页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR)扩增gcd基因 | 第54-55页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳鉴定目的基因gcd片段并回收 | 第55页 |
| ·pET-28a质粒载体的提取 | 第55-56页 |
| ·酶切连接 | 第56-57页 |
| ·转化 | 第57-58页 |
| ·菌落PCR筛选阳性克隆 | 第58页 |
| ·pET28a-gcd的酶切鉴定 | 第58-59页 |
| ·结果与讨论 | 第59-63页 |
| ·E.coli BL21基因组DNA的提取 | 第59-60页 |
| ·gcd基因片段PCR扩增 | 第60页 |
| ·pET28a质粒提取 | 第60-61页 |
| ·酶切连接后转化 | 第61页 |
| ·2K片段菌落PCR | 第61-62页 |
| ·提取质粒单、双酶切鉴定 | 第62-63页 |
| ·本章小结 | 第63-64页 |
| 第五章 工程菌表达PQQGDH的研究 | 第64-72页 |
| ·引言 | 第64页 |
| ·实验材料 | 第64-65页 |
| ·菌株与质粒 | 第64页 |
| ·试剂与仪器 | 第64-65页 |
| ·培养基 | 第65页 |
| ·实验方法 | 第65-66页 |
| ·SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)鉴定重组蛋白 | 第65-66页 |
| ·pET28a-gcd工程菌的表达条件优化 | 第66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-70页 |
| ·SDS-PAGE检测分析PQQGDH | 第67页 |
| ·葡萄糖对PQQGDH表达量的影响 | 第67-68页 |
| ·MgCl_2对PQQGDH表达量的影响 | 第68-70页 |
| ·本章小结 | 第70-72页 |
| 第六章 实验总结与建议 | 第72-74页 |
| ·主要结论 | 第72页 |
| ·本课题创新点 | 第72-73页 |
| ·问题与建议 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-78页 |
| 附录1 试剂 | 第78-80页 |
| 附录2 仪器设备 | 第80-82页 |
| 致谢 | 第82-84页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第84-86页 |
| 作者和导师简介 | 第86-87页 |
| 附件 | 第87-88页 |
