| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1 成肌细胞增殖和分化过程 | 第11-13页 |
| 2 长非编码RNA | 第13-19页 |
| 2.1 长非编码RNA概述 | 第13-14页 |
| 2.2 lncRNA的功能研究 | 第14-17页 |
| 2.2.1 lncRNA对细胞增殖的影响 | 第14-15页 |
| 2.2.2 lncRNA对肌细胞分化的调控 | 第15-16页 |
| 2.2.3 lncRNAs与肌肉疾病 | 第16-17页 |
| 2.3 lncRNA的分子机制 | 第17-18页 |
| 2.4 lncRNA研究技术 | 第18-19页 |
| 3 本研究的目的和意义 | 第19-21页 |
| 第二章 材料和方法 | 第21-42页 |
| 1 实验材料 | 第21-26页 |
| 1.1 实验样品 | 第21页 |
| 1.1.1 组织样品 | 第21页 |
| 1.1.2 细胞样品 | 第21页 |
| 1.1.3 克隆载体 | 第21页 |
| 1.2 主要仪器设备 | 第21-22页 |
| 1.3 主要试剂和试剂盒 | 第22-23页 |
| 1.4 常用试剂及其配制 | 第23-24页 |
| 1.5 表达谱芯片 | 第24-25页 |
| 1.6 主要数据库和软件 | 第25页 |
| 1.7 所用载体 | 第25-26页 |
| 2 试验方法 | 第26-42页 |
| 2.1 构建小鼠组织表达谱 | 第26-28页 |
| 2.1.1 小鼠组织样总RNA提取 | 第26-27页 |
| 2.1.2 RNA质量浓度检测 | 第27页 |
| 2.1.3 RNA反转录成cDNA | 第27-28页 |
| 2.2 细胞培养 | 第28-29页 |
| 2.2.1 细胞的复苏 | 第28页 |
| 2.2.2 细胞的冻存 | 第28-29页 |
| 2.2.3 细胞的增殖培养 | 第29页 |
| 2.2.4 细胞的分化培养 | 第29页 |
| 2.3 AK004418-siRNA片段的选取 | 第29-30页 |
| 2.4 AK00418超表达载体构建 | 第30-33页 |
| 2.4.1 AK004418 cDNA的克隆 | 第30-31页 |
| 2.4.2 琼脂糖凝胶电泳和成像 | 第31页 |
| 2.4.3 PCR产物的胶回收和克隆测序 | 第31-33页 |
| 2.4.4 质粒提取 | 第33页 |
| 2.4.5 pcDNA3.1-AK004418真核表达载体的酶切鉴定 | 第33页 |
| 2.5 脂质体介导的细胞转染（6 孔板） | 第33-34页 |
| 2.6 细胞RNA提取 | 第34页 |
| 2.7 Quantitative real-time PCR分析 | 第34-37页 |
| 2.7.1 cDNA的合成 | 第34页 |
| 2.7.2 PCR的引物设计 | 第34-36页 |
| 2.7.3 荧光实时定量PCR | 第36页 |
| 2.7.4 定量数据分析 | 第36-37页 |
| 2.8 RACE扩增及序列检测 | 第37-39页 |
| 2.8.1 制备 5’/3’ RACE第一链 | 第37页 |
| 2.8.2 设计PCR扩增引物 | 第37-38页 |
| 2.8.3 快速扩增cDNA Ends | 第38-39页 |
| 2.8.4 琼脂糖凝胶电泳和成像 | 第39页 |
| 2.8.5 PCR产物的胶回收和克隆测序 | 第39页 |
| 2.9 细胞核和细胞质的RNA分离 | 第39页 |
| 2.10 蛋白检测分析 | 第39-41页 |
| 2.10.1 蛋白的提取 | 第39页 |
| 2.10.2 蛋白质的检测 | 第39-41页 |
| 2.11 免疫荧光 | 第41-42页 |
| 第三章 研究结果 | 第42-59页 |
| 1 AK004418与侧翼基因SYNPO2的基本特性 | 第42-44页 |
| 1.1 AK004418的 5’RACE和 3’RACE | 第42页 |
| 1.2 软件预测AK004418的蛋白编码能力 | 第42-43页 |
| 1.3 AK004418与SYNPO2的组织表达谱 | 第43页 |
| 1.4 AK004418与SYNPO2在细胞分化不同时期的表达情况 | 第43-44页 |
| 1.5 AK004418的核质定位 | 第44页 |
| 2 干涉AK004418对SYNPO2基因的表达以及成肌细胞增殖和分化的影响 | 第44-50页 |
| 2.1 AK004418的干涉效率 | 第44-45页 |
| 2.2 干涉AK004418对SYNPO2基因表达的影响 | 第45-46页 |
| 2.3 干涉AK004418对成肌细胞增殖的影响 | 第46-47页 |
| 2.4 干涉AK004418对成肌细胞分化相关基因表达的影响 | 第47-50页 |
| 3 超表达AK004418对SYNPO2基因表达以及成肌细胞增殖和分化的影响 | 第50-55页 |
| 3.1 AK004418超表达载体的酶切鉴定及超表达效率检测 | 第50页 |
| 3.2 超表达AK004418对SYNPO2基因表达的影响 | 第50-51页 |
| 3.3 超表达AK004418对成肌细胞增殖的影响 | 第51-52页 |
| 3.4 超表达AK004418对成肌细胞分化相关基因表达的影响 | 第52-55页 |
| 4 利用microarray检测基因表达的变化情况并做相关分析 | 第55-59页 |
| 4.1 芯片结果统计及定量验证 | 第55-57页 |
| 4.2 GO分析 | 第57-58页 |
| 4.3 Pathway分析 | 第58-59页 |
| 第四章 讨论 | 第59-63页 |
| 1 长非编码RNA AK004418功能分析 | 第59-61页 |
| 2 长非编码RNA AK004418调控机制的预测 | 第61-62页 |
| 3 下一步计划 | 第62-63页 |
| 小结 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
