| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 1 绪论 | 第9-14页 |
| 1.1 引言 | 第9页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第9-11页 |
| 1.3 本研究目的及意义 | 第11-13页 |
| 1.4 技术路线 | 第13-14页 |
| 2 柽柳ThbHLH1基因及其启动子的克隆 | 第14-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第14-15页 |
| 2.1.1 柽柳ThbHLH1基因的EST序列 | 第14页 |
| 2.1.2 植物材料 | 第14页 |
| 2.1.3 菌种与载体 | 第14页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第14-15页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第15页 |
| 2.2 实验方法 | 第15-26页 |
| 2.2.1 柽柳基因组DNA的提取 | 第15页 |
| 2.2.2 ThbHLH1基因多序列比对和引物设计 | 第15-16页 |
| 2.2.3 柽柳ThbHLH1基因的克隆及pMD18-T- ThbHLH1的构建 | 第16-17页 |
| 2.2.4 TAIL-PCR法克隆ThbHLH11启动子序列 | 第17-21页 |
| 2.2.5 ThbHLH1基因及启动子序列的生物信息学分析 | 第21页 |
| 2.2.6 ThbHLH1基因启动子的表达特性分析 | 第21-23页 |
| 2.2.7 ThbHLH1基因的亚细胞定位 | 第23-26页 |
| 2.3 结果与分析 | 第26-31页 |
| 2.3.1 ThbHLH1基因多序列比对 | 第26页 |
| 2.3.2 柽柳ThbHLH1基因的克隆及pMD18-T-ThbHLH1的构建 | 第26页 |
| 2.3.3 三轮TAIL-PCR的电泳结果 | 第26-27页 |
| 2.3.4 ThbHLH1基因及启动子序列的获得 | 第27-29页 |
| 2.3.5 ThbHLH1基因启动子序列的生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 2.3.6 ThbHLH1基因的亚细胞定位 | 第30-31页 |
| 2.4 本章小结 | 第31-32页 |
| 3 ThbHLH1转录因子的表达及功能分析 | 第32-51页 |
| 3.1 实验材料 | 第32页 |
| 3.1.1 植物材料 | 第32页 |
| 3.1.2 实验菌种 | 第32页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-40页 |
| 3.2.1 植物过表达载体pROKⅡ -ThbHLH1的构建 | 第32-35页 |
| 3.2.2 pROK Ⅱ-ThbHLH1电击转化农杆菌 | 第35-36页 |
| 3.2.3 转ThbHLH1基因拟南芥抗逆性功能分析 | 第36页 |
| 3.2.4 非生物胁迫下转基因拟南芥成苗的抗逆分析 | 第36页 |
| 3.2.5 组织化学染色技术研究转基因植株的ROS水平及细胞受损情况 | 第36-37页 |
| 3.2.6 非生物胁迫下转基因拟南芥的生理生化指标分析 | 第37-40页 |
| 3.3 结果与分析 | 第40-49页 |
| 3.3.1 T1代转基因拟南芥的PCR鉴定 | 第40页 |
| 3.3.2 过表达ThbHLH1提高了拟南芥对盐胁迫的抗性 | 第40-42页 |
| 3.3.3 非生物胁迫下转基因拟南芥成苗的抗逆分析 | 第42-43页 |
| 3.3.4 组织化学染色技术研究转基因植株的ROS水平及细胞受损情况 | 第43-46页 |
| 3.3.5 非生物胁迫下转基因拟南芥的生理生化指标分析 | 第46-49页 |
| 3.4 本章小结 | 第49-51页 |
| 4 瞬时转化柽柳的研究 | 第51-63页 |
| 4.1 实验材料 | 第51页 |
| 4.1.1 植物材料 | 第51页 |
| 4.1.2 菌种材料 | 第51页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第51页 |
| 4.2 实验方法 | 第51-56页 |
| 4.2.1 pFGC5941-ThbHLH1-Cis的构建 | 第51-53页 |
| 4.2.2 pFGC5941-ThbHLH1的构建 | 第53-54页 |
| 4.2.3 pFGC5941-ThbHLH1转化根癌农杆菌EHA105 | 第54页 |
| 4.2.4 柽柳的瞬时侵染 | 第54-56页 |
| 4.2.5 ThSOD和ThPOD基因的表达 | 第56页 |
| 4.3 结果分析 | 第56-62页 |
| 4.3.1 植物抑制表达载体pFGC5941-ThbHLH1的构建 | 第56页 |
| 4.3.2 非生物胁迫下瞬时侵染柽柳苗的抗逆分析 | 第56-58页 |
| 4.3.3 非生物胁迫下瞬时侵染柽柳的生理生化指标分析 | 第58-61页 |
| 4.3.4 ThSOD和ThPOD基因的表达 | 第61-62页 |
| 4.4 本章小结 | 第62-63页 |
| 5 ThbHLH1上游表达调控基因的研究 | 第63-76页 |
| 5.1 实验材料 | 第63-65页 |
| 5.1.1 植物材料 | 第63页 |
| 5.1.2 菌株和载体 | 第63页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第63页 |
| 5.1.4 培养基 | 第63-64页 |
| 5.1.5 溶液配制 | 第64-65页 |
| 5.2 实验方法 | 第65-71页 |
| 5.2.1 报告载体的构建 | 第65-66页 |
| 5.2.2 柽柳ThDof基因CDNA文库的构建 | 第66页 |
| 5.2.3 重组报告载体质粒和柽柳cDNA文库共转化酵母细胞 | 第66-67页 |
| 5.2.4 阳性克隆的互作分析 | 第67页 |
| 5.2.5 报告载体与效应载体的构建 | 第67-68页 |
| 5.2.6 基因枪瞬时转化烟草验证ThbHLH1与顺式作用元件结合 | 第68-69页 |
| 5.2.7 CHIP验证ThDof16与DOF元件在启动子中的互作 | 第69-71页 |
| 5.3 结果与分析 | 第71-75页 |
| 5.3.1 pHIS2-靶DNA重组报告载体的获得 | 第71页 |
| 5.3.2 ThDof基因特异识别DOF顺式作用元件结果 | 第71-72页 |
| 5.3.3 ThDof16基因对元件和突变元件的识别 | 第72页 |
| 5.3.4 ThDof16基因对ThbHLH1基因启动子片段的识别 | 第72-73页 |
| 5.3.5 THDof16与顺式作用元件在烟草体内的相互作用 | 第73-74页 |
| 5.3.6 CHIP验证ThDof16与DOF元件在启动子中的互作 | 第74-75页 |
| 5.4 本章小结 | 第75-76页 |
| 6 柽柳ThbHLH1识别的顺式作用元件的研究 | 第76-82页 |
| 6.1 实验材料 | 第76页 |
| 6.1.1 菌株和载体 | 第76页 |
| 6.1.2 主要试剂 | 第76页 |
| 6.1.3 培养基 | 第76页 |
| 6.1.4 溶液配制 | 第76页 |
| 6.2 实验方法 | 第76-78页 |
| 6.2.1 构建pHIS2-元件重组报告载体 | 第76-77页 |
| 6.2.2 构建pHIS2-元件突变报告载体 | 第77页 |
| 6.2.3 重组报告载体质粒和柽柳cDNA文库共转化酵母细胞 | 第77-78页 |
| 6.2.4 阳性克隆的互作分析 | 第78页 |
| 6.2.5 基因枪瞬时转化烟草验证ThbHLH1与顺式作用元件结合 | 第78页 |
| 6.3 结果与分析 | 第78-81页 |
| 6.3.1 柽柳ThbHLH1识别的顺式作用元件的研究 | 第78-79页 |
| 6.3.2 ThbHLH1与顺式作用元件在烟草体内的相互作用 | 第79-81页 |
| 6.4 本章小结 | 第81-82页 |
| 结论 | 第82-83页 |
| 参考文献 | 第83-87页 |
| 附录 | 第87-88页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
