| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-13页 |
| 1. 引言 | 第13-29页 |
| ·非生物胁迫下植物钙信号转导机制研究现状 | 第13-20页 |
| ·钙结合蛋白的种类及特性 | 第13-14页 |
| ·CBL、CIPK家族成员表达方式多样性与功能丰富性 | 第14-16页 |
| ·CBL-CIPK信号网络系统在盐胁迫下的转导机制研究 | 第16-17页 |
| ·CBL-CIPK网络系统在营养物质吸收方面的作用机制及研究现状 | 第17-20页 |
| ·CBL-CIPK网络系统在其他方面的作用机制及研究现状 | 第20页 |
| ·胡杨与钙信号通路 | 第20-21页 |
| ·转基因技术研究现状 | 第21-25页 |
| ·拟南芥转基因技术 | 第23-24页 |
| ·三倍体毛白杨转基因技术研究现状 | 第24-25页 |
| ·甘露糖正向筛选体系的研究进展 | 第25-27页 |
| ·6-磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因 | 第25-26页 |
| ·甘露糖筛选体系安全性评估 | 第26-27页 |
| ·本研究的工作思路和工作方案 | 第27-29页 |
| 2. 胡杨PeCBL6,PeCBL10的克隆与分析 | 第29-42页 |
| ·材料与方法 | 第29-30页 |
| ·实验材料 | 第29页 |
| ·实验试剂及仪器设施 | 第29-30页 |
| ·试剂配制 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-36页 |
| ·材料处理 | 第30页 |
| ·胡杨总RNA的提取 | 第30-32页 |
| ·反转录反应 | 第32页 |
| ·胡杨PeCBL6,PeCBL10基因的克隆 | 第32-33页 |
| ·PCR扩增产物的琼脂糖电泳检测及回收 | 第33-34页 |
| ·回收DNA片段与克隆载体pMD18-T Vector连接 | 第34页 |
| ·转化大肠杆菌感受态细胞 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的抗生素筛选 | 第35页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定及测序分析 | 第35页 |
| ·大肠杆菌质粒小提 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-41页 |
| ·胡杨PeCBL6,PeCBL10基因的克隆 | 第36-37页 |
| ·胡杨PeCBL6,PeCBL10基因的序列分析 | 第37-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| 3. 胡杨PeCBL6,PeCBL10的表达特征分析及业细胞定位分析 | 第42-56页 |
| ·材料与方法 | 第42-49页 |
| ·实验材料 | 第42-44页 |
| ·实验方法 | 第44-47页 |
| ·农杆菌介导的拟南芥的遗传转化 | 第47-48页 |
| ·PeCBL6,PeCBL1O基因亚细胞定位分析 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-54页 |
| ·PeCBL6,PeCBL10的组织表达特性分析 | 第49-50页 |
| ·胡杨PeCBL6,PeCBL10基因在不同胁迫处理下的表达分析 | 第50-51页 |
| ·pBll21-GFP-PeCBL6,pBll21-GFP-PeCBL10载体的构建 | 第51-52页 |
| ·转基因拟南芥的筛选与鉴定 | 第52-53页 |
| ·PeCBL6,PeCBL10基因的亚细胞定位分析 | 第53-54页 |
| ·讨论 | 第54-56页 |
| ·胡杨PeCBL6,PeCBL10基因的表达特征 | 第54-55页 |
| ·PeCBL6,PeCBL10亚细胞定位分析 | 第55-56页 |
| 4. 酵母双杂分析胡杨PeCBL6、PeCBL10基因与PeCIPK成员的结介性 | 第56-61页 |
| ·材料与方法 | 第56-58页 |
| ·试剂和材料 | 第56页 |
| ·仪器设备 | 第56页 |
| ·培养基的配制 | 第56页 |
| ·酵母表达载体pGBKT7-PeCBL6,pGBKT7-PeCBL10的构建 | 第56-57页 |
| ·酵母的的高效转化 | 第57-58页 |
| ·PeCBL6、PeCBL10基因与下游PeCIPK成员酵母双杂分析 | 第58页 |
| ·结果与分析 | 第58-60页 |
| ·pGBKT7-PeCBL6,pGBKT7-PeCBL10酵母表达载体的构建 | 第58-59页 |
| ·PeCBL6,PeCBL10基因与下游PeCIPK成员存在相互作用 | 第59-60页 |
| ·讨论 | 第60-61页 |
| 5. 胡杨PeCBL6,PeCBL10基因的拟南芥遗传化研究 | 第61-69页 |
| ·材料与方法 | 第61-65页 |
| ·植物材料 | 第61页 |
| ·工程菌株、质粒载体及实验试剂盒 | 第61页 |
| ·主要实验试剂和常用培养基 | 第61页 |
| ·仪器设施 | 第61页 |
| ·实验方法 | 第61-65页 |
| ·结果与分析 | 第65-67页 |
| ·植物表达载体pCAMBIA1301-PeCBL6-PMI、pCAMBIA1301-PeCBL10-PM #I的构建 | 第65-66页 |
| ·转基因拟南芥的半定量RT-PCR检测 | 第66-67页 |
| ·转基因拟南芥的形态观察 | 第67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| 6. 转基因拟南芥的抗逆性分析 | 第69-88页 |
| ·材料与方法 | 第69-72页 |
| ·植物材料、试剂和仪器 | 第69页 |
| ·转基因拟南芥在盐胁迫下的抗性检测 | 第69-70页 |
| ·转基因拟南芥在低温处理下的抗性检测 | 第70页 |
| ·转基因拟南芥在旱胁迫下的抗性检测 | 第70-71页 |
| ·叶绿素含量的测定 | 第71页 |
| ·叶绿素荧光参数F_v/F_m的测定 | 第71-72页 |
| ·拟南芥中下游抗逆基因的检测 | 第72页 |
| ·结果与分析 | 第72-86页 |
| ·拟南芥在NaCl胁迫下的生长发育情况 | 第72-77页 |
| ·拟南芥在低温胁迫下的生长发育情况 | 第77-82页 |
| ·拟南芥在旱胁迫下的生长发育情况 | 第82-85页 |
| ·PeCBL6,PeCBL10基因的过表达诱导拟南芥下游抗性基因表达 | 第85-86页 |
| ·讨论 | 第86-88页 |
| 7. 三倍体毛白杨遗传转化体系的建立 | 第88-91页 |
| ·材料与方法 | 第88-89页 |
| ·菌株与植物材料 | 第88页 |
| ·实验试剂及常用培养基 | 第88页 |
| ·三倍体毛白杨的遗传分析 | 第88页 |
| ·叶片分化的甘露糖敏感性测试 | 第88-89页 |
| ·结果与分析 | 第89-90页 |
| ·三倍体毛白杨的遗传分析 | 第89页 |
| ·甘露糖敏感性试验 | 第89-90页 |
| ·讨论 | 第90-91页 |
| 8. 胡杨PeCBL6,PeCBL1O基因的三倍体毛白杨遗传转化研究 | 第91-98页 |
| ·材料与方法 | 第91-94页 |
| ·植物材料 | 第91页 |
| ·工程菌株与质粒载体 | 第91页 |
| ·工程酶和主要实验试剂 | 第91页 |
| ·实验试剂及常用培养基 | 第91-92页 |
| ·实验方法 | 第92-94页 |
| ·结果与分析 | 第94-96页 |
| ·转基因植株的获得 | 第94页 |
| ·转基因三倍体毛白杨的分子检测 | 第94-96页 |
| ·转基因三倍体毛白杨的半定量RT-PCR检测 | 第96页 |
| ·转基因三倍体毛白杨的形态观察 | 第96页 |
| ·讨论 | 第96-98页 |
| 9. 转基因三倍体毛白杨的抗逆性分析 | 第98-106页 |
| ·材料与方法 | 第98-100页 |
| ·植物材料、试剂和仪器 | 第98页 |
| ·转基因三倍体毛白杨在盐胁迫下的抗性检测 | 第98页 |
| ·转基因三倍体毛白杨在低温胁迫下的抗性检测 | 第98-99页 |
| ·转基因三倍体毛白杨在早胁迫下的抗性检测 | 第99页 |
| ·枯萎叶片数的计算 | 第99页 |
| ·叶绿素含量的测定 | 第99页 |
| ·相对电导率的测定 | 第99页 |
| ·丙二醛物质含量的测定 | 第99-100页 |
| ·结果与分析 | 第100-104页 |
| ·转基因三倍体毛白杨在NaCl胁迫下的生长发育情况 | 第100-102页 |
| ·转基因三倍体毛白杨在低温胁迫下的生长发育情况 | 第102-103页 |
| ·转基因三倍体毛白杨在旱胁迫下的生发育情况 | 第103-104页 |
| ·讨论 | 第104-106页 |
| 10. 结论与展望 | 第106-109页 |
| ·结论 | 第106-107页 |
| ·创新点 | 第107页 |
| ·展望 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-117页 |
| 个人简介 | 第117-118页 |
| 导师简介 | 第118-120页 |
| 获得成果目录 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121页 |
