| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 英文缩写词 | 第6-11页 |
| 第一部分 文献综述 引言 | 第11-29页 |
| 1.抗病毒基因工程的研究进展 | 第11-23页 |
| 1.1 病原来源的抗性基因策略 | 第11-18页 |
| 1.1.1 病毒蛋白介导的抗性策略 | 第11-15页 |
| 1.1.1.1 外壳蛋白介导的抗性 | 第11-13页 |
| 1.1.1.2 复制酶基因介导的抗性 | 第13-14页 |
| 1.1.1.3 运动蛋白介导的抗性 | 第14-15页 |
| 1.1.1.4 其他蛋白介导的抗性策略 | 第15页 |
| 1.1.2 病毒RNA介导的抗性策略 | 第15-18页 |
| 1.1.2.1 卫星RNA基因策略 | 第15-16页 |
| 1.1.2.2 病毒反义RNA | 第16-17页 |
| 1.2.2.3 缺陷干扰RNA | 第17页 |
| 1.2.2.4 人工微小RNA介导的抗性策略 | 第17-18页 |
| 1.2 植物来源的病毒抗性基因策略 | 第18-21页 |
| 1.2.1 显性抗病基因介导的策略 | 第18页 |
| 1.2.2 植物隐性R基因介导的抗性 | 第18-20页 |
| 1.2.3 防御应答因子 | 第20-21页 |
| 1.3 其他来源的基因介导的抗性 | 第21-22页 |
| 1.3.1 抑制剂蛋白介导的抗性 | 第21页 |
| 1.3.2 核酸基因抗性策略 | 第21-22页 |
| 1.3.3 植物抗体介导的抗性 | 第22页 |
| 1.3.4 其他抗性策略 | 第22页 |
| 1.4 抗病毒基因工程中存留的问题 | 第22-23页 |
| 2.甜瓜及其基因工程研究进展 | 第23-28页 |
| 2.1 甜瓜组培研究进展 | 第23-26页 |
| 2.1.1 种子处理方法 | 第23-24页 |
| 2.1.2 消毒方法对种子萌发的影响 | 第24页 |
| 2.1.3 基因型对诱导不定芽的影响 | 第24页 |
| 2.1.4 苗龄对诱导不定芽的影响 | 第24页 |
| 2.1.5 外植体对诱导不定芽的影响 | 第24-25页 |
| 2.1.6 激素组合对分化的影响 | 第25-26页 |
| 2.1.7 培养条件对分化的影响 | 第26页 |
| 2.2 转基因技术在甜瓜上的应用 | 第26-28页 |
| 2.2.1 遗传转化的方法 | 第26页 |
| 2.2.2 预培养对转化的影响 | 第26-27页 |
| 2.2.3 共培养对转化的影响 | 第27-28页 |
| 2.3 转基因甜瓜抗病性的改良和展望 | 第28页 |
| 3.研究目的与意义 | 第28-29页 |
| 第二部分 实验内容 | 第29-60页 |
| 第一章 WMV CP基因的克隆及植物表达载体的构建 | 第29-40页 |
| 1 材料、药剂与仪器 | 第29-30页 |
| 1.1 材料 | 第29页 |
| 1.2 实验试剂及培养基 | 第29-30页 |
| 1.3 仪器和设备 | 第30页 |
| 2 方法 | 第30-35页 |
| 2.1 植物RNA提取 | 第30-31页 |
| 2.2 WMV cDNA的合成 | 第31页 |
| 2.3 PCR扩增 | 第31-32页 |
| 2.4 T-A克隆及转化 | 第32页 |
| 2.5 菌落PCR及双酶切鉴定重组质粒pEASY-T1-CP | 第32-33页 |
| 2.6 双酶切质粒pEASY-T1-CP和载体pCAMBIA2300并回收 | 第33页 |
| 2.7 连接有效片段 | 第33-34页 |
| 2.8 转化并筛选重组质粒pCAMBIA2300-CP | 第34-35页 |
| 3 结果 | 第35-39页 |
| 3.1 西瓜花叶病毒CP基因 | 第35页 |
| 3.2 菌落PCR鉴定pEASY-T1-CP | 第35-36页 |
| 3.3 双酶切重组质粒pEASY-T1-CP及pCAMBIA230 | 第36页 |
| 3.4 回收载体pEASY-T1-CP和pCAMBIA2300有效片段 | 第36-37页 |
| 3.5 重组质粒 pEASY-T1-CP的测序 | 第37页 |
| 3.6 菌落PCR及酶切鉴定重组质粒p CAMBIA2300-CP | 第37页 |
| 3.7 双酶切鉴定重组质粒pCAMBIA2300-CP | 第37-38页 |
| 3.8 菌落PCR鉴定转化pCAMBIA2300-CP的根癌农杆菌 | 第38-39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 第二章“伽师”再生体系的建立 | 第40-46页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第40-41页 |
| 1.1 材料 | 第40页 |
| 1.2 主要仪器 | 第40页 |
| 1.3 试剂及配制 | 第40-41页 |
| 1.3.1 主要试剂 | 第40-41页 |
| 1.3.2 配制方法 | 第41页 |
| 2 方法 | 第41-42页 |
| 2.1 再生体系的建立 | 第41-42页 |
| 2.1.1 无菌苗的获得 | 第41页 |
| 2.1.2 诱导不定芽 | 第41页 |
| 2.1.3 AgNO3对不定芽诱导的影响 | 第41-42页 |
| 2.1.4 不定芽伸长 | 第42页 |
| 2.1.5 不定芽生根 | 第42页 |
| 2.1.6 再生植株的驯化及移栽 | 第42页 |
| 2.2 项目测定 | 第42页 |
| 3 结果 | 第42-45页 |
| 3.16-BA对不定芽诱导的影响 | 第42页 |
| 3.2 AgNO3对不定芽诱导的影响 | 第42-43页 |
| 3.3 不定芽的伸长和生根 | 第43-44页 |
| 3.4 练苗及移栽 | 第44-45页 |
| 4 讨论 | 第45-46页 |
| 第三章 WMV CP基因的转化 | 第46-53页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第46-47页 |
| 1.1 材料 | 第46页 |
| 1.2 试剂、培养基及配制 | 第46-47页 |
| 1.2.1 主要试剂 | 第46页 |
| 1.2.2 培养基 | 第46-47页 |
| 1.2.3 配制方法 | 第47页 |
| 1.3 主要仪器 | 第47页 |
| 2 方法 | 第47-50页 |
| 2.1 遗传转化 | 第47-48页 |
| 2.1.1 无菌苗的获得 | 第47-48页 |
| 2.1.2 预培养 | 第48页 |
| 2.1.3 农杆菌浸染及共培养 | 第48页 |
| 2.1.4 不定芽伸长 | 第48页 |
| 2.1.5 不定芽生根 | 第48页 |
| 2.1.6 驯化及移栽 | 第48页 |
| 2.2 转基因植株的鉴定 | 第48-50页 |
| 2.2.1 植物DNA的提取 | 第48-49页 |
| 2.2.2 PCR鉴定转基因植株 | 第49-50页 |
| 3 结果 | 第50-52页 |
| 3.1 烟草的遗传转化 | 第50-51页 |
| 3.2 甜瓜的遗传转化 | 第51页 |
| 3.3 PCR鉴定转基因烟草及甜瓜 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-53页 |
| 第四章 转基因烟草生理生化分析 | 第53-60页 |
| 1 材料、试剂与仪器 | 第53页 |
| 1.1 材料 | 第53页 |
| 1.2 试剂及配制 | 第53页 |
| 2 方法 | 第53-56页 |
| 2.1 三种酶活性测定 | 第53-55页 |
| 2.1.1 总蛋白的提取 | 第53-54页 |
| 2.1.2 SOD酶活性测定 | 第54页 |
| 2.1.3 POD活性测定 | 第54-55页 |
| 2.1.4 CAT活性测定 | 第55页 |
| 2.2 T1代烟草遗传分析 | 第55-56页 |
| 3 结果 | 第56-59页 |
| 3.1 T0代烟草抗氧化酶类的检测 | 第56-57页 |
| 3.2 T1代烟草遗传分析 | 第57-59页 |
| 4 讨论 | 第59-60页 |
| 第三部分 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第69-70页 |
