| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 第一章 绪论 | 第12-36页 |
| 第一节 表观遗传背景介绍 | 第12-27页 |
| 一、染色体结构介绍 | 第12-13页 |
| 二、核小体对DNA复制和转录的影响 | 第13-16页 |
| 三、组蛋白翻译后修饰 | 第16-18页 |
| 四、组蛋白翻译后修饰酶 | 第18-20页 |
| 五、组蛋白修饰结合蛋白 | 第20-23页 |
| 六、组蛋白密码假说 | 第23-24页 |
| 七、酿酒酵母中组蛋白的甲基化 | 第24-26页 |
| 八、酿酒酵母中组蛋白的去甲基化 | 第26-27页 |
| 第二节 Rphl的功能及背景介绍 | 第27-28页 |
| 第三节 酿酒酵母中DNA损伤信号通路 | 第28-32页 |
| 第四节 自噬介绍 | 第32-36页 |
| 第二章 实验材料和实验方法 | 第36-53页 |
| 第一节 实验材料 | 第36-38页 |
| 一、酵母菌株以及培养基配制 | 第36页 |
| 二、抗体 | 第36页 |
| 三、酵母转化相关材料 | 第36-37页 |
| 四、荧光实验相关材料 | 第37页 |
| 五、核酸操作及检测试剂盒 | 第37页 |
| 六、其它试剂 | 第37页 |
| 七、耗材 | 第37页 |
| 八、特殊仪器和设备 | 第37-38页 |
| 第二节 实验方法 | 第38-53页 |
| 一、克隆与PCR | 第38-39页 |
| 二、酿酒酵母的培养以及特殊药物处理 | 第39-43页 |
| 三、酵母的转化 | 第43页 |
| 四、酵母的同源重组 | 第43-44页 |
| 五、基因组DNA的提取 | 第44页 |
| 六、酵母RNA的提取以及RT-PCR | 第44页 |
| 七、梯度稀释 | 第44-45页 |
| 八、蛋白样的处理方法和免疫印迹 | 第45页 |
| 九、免疫共沉淀 | 第45-46页 |
| 十、TAP(tandom affinity purification)纯化 | 第46页 |
| 十一、体外乙酰化实验和液闪实验 | 第46-47页 |
| 十二、荧光实验 | 第47页 |
| 十三、FM4-64染色 | 第47页 |
| 十四、MNase实验 | 第47-48页 |
| 十五、染色质免疫共沉淀(ChIP)实验 | 第48-49页 |
| 十六、质谱-割胶纯化 | 第49-50页 |
| 十七、从大肠杆菌中纯化重组蛋白 | 第50-51页 |
| 十八、Rph1和Set2抗体的制备 | 第51页 |
| 十九、rph1△芯片分析 | 第51-52页 |
| 二十、α-因子释放实验 | 第52-53页 |
| 第三章 实验结果与讨论 | 第53-95页 |
| 第一节 研究背景与立项依据 | 第53-54页 |
| 第二节 实验结果 | 第54-92页 |
| 一、Rph1内源抗体的制备 | 第54-55页 |
| 二、在DNA损伤信号通路中,Rph1起负调控作用 | 第55-57页 |
| 三、ChIP-Seq数据分析: | 第57-64页 |
| 四、在DNA损伤刺激下,Rph1蛋白水平下降 | 第64-66页 |
| 五、在其他刺激条件下,Rph1蛋白水平也不稳定 | 第66-67页 |
| 六、Rph1不是通过26s蛋白酶体途径降解 | 第67-68页 |
| 七、Rph1需要进入细胞质才能被降解 | 第68-70页 |
| 八、Rph1从细胞核转入细胞质需要核输出蛋白Crm1 | 第70-74页 |
| 九、Rph1进入细胞质以后通过自噬通路降解 | 第74-79页 |
| 十、磷酸化并不影响Rph1的降解 | 第79页 |
| 十一、乙酰化修饰介导了Rph1的降解 | 第79-84页 |
| 十二、Rph1乙酰化位点的鉴定及功能 | 第84-87页 |
| 十三、Gcn5介导的乙酰化影响了Rph1从细胞核进入细胞质 | 第87-92页 |
| 第三节 讨论与展望 | 第92-95页 |
| 论文创新点 | 第95-96页 |
| 参考文献 | 第96-104页 |
| 缩略词表 | 第104-106页 |
| 作者简历 | 第106-109页 |
| 致谢 | 第109-110页 |
