| 缩写表 | 第3-5页 |
| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一部分 文献综述 | 第14-46页 |
| 一 植物质外体的研究进展 | 第14-35页 |
| 1 植物质外体 | 第14-17页 |
| 1.1 植物细胞壁 | 第14-15页 |
| 1.2 植物细胞壁间隙空间 | 第15-16页 |
| 1.3 质外体的功能 | 第16-17页 |
| 2 植物质外体蛋白 | 第17-27页 |
| 2.1 植物细胞壁结构蛋白 | 第17-19页 |
| 2.1.1 Extensin | 第17-18页 |
| 2.1.2 AGPs | 第18页 |
| 2.1.3 GRPs | 第18-19页 |
| 2.2 细胞壁酶蛋白 | 第19-21页 |
| 2.2.1 Invertase | 第19-20页 |
| 2.2.2 Expansin | 第20页 |
| 2.2.3 Chitinase | 第20-21页 |
| 2.3 植物细胞外多肽 | 第21-27页 |
| 2.3.1 systemin | 第21-22页 |
| 2.3.2 PSK | 第22-24页 |
| 2.3.3 SCR | 第24-25页 |
| 2.3.4 CLAVATA 3 | 第25-26页 |
| 2.3.5 其他细胞外多肽信号分子 | 第26-27页 |
| 3 研究植物质外体蛋白分离鉴定的组学方法及其进展 | 第27-35页 |
| 3.1 质外体蛋白的提取 | 第28-30页 |
| 3.1.1 非损伤提取（non-disruptive）方法 | 第28-29页 |
| 3.1.2 损伤提取（disruptive）方法 | 第29-30页 |
| 3.2 质外体蛋白的分离和鉴定 | 第30-33页 |
| 3.2.1 生化和蛋白质组的方法 | 第30-31页 |
| 3.2.2 生物信息学的方法 | 第31-33页 |
| 3.2.3 其他方法 | 第33页 |
| 3.3 质外体分泌蛋白的蛋白质组的研究 | 第33-35页 |
| 二 植物半胱氨酸蛋白酶及其抑制剂的研究进展 | 第35-46页 |
| 1 植物半胱氨酸蛋白酶 | 第35-41页 |
| 1.1 植物半胱氨酸蛋白酶分类及其特点 | 第35-37页 |
| 1.1.1 半胱氨酸蛋白酶分类 | 第35页 |
| 1.1.2 半胱氨酸蛋白酶的特点 | 第35-36页 |
| 1.1.3 植物半胱氨酸蛋白酶的合成、运输 | 第36-37页 |
| 1.1.4 植物半胱氨酸蛋白酶的亚细胞定位 | 第37页 |
| 1.2 植物半胱氨酸蛋白酶基因及其调控 | 第37-39页 |
| 1.3 植物半胱氨酸蛋白酶功能研究 | 第39-41页 |
| 1.3.1 参与贮存蛋白的降解和沉积 | 第39页 |
| 1.3.2 参与衰老和细胞程序性死亡 | 第39-40页 |
| 1.3.3 参与对非生物胁迫和生物胁迫的响应 | 第40-41页 |
| 1.3.4 其他重要功能 | 第41页 |
| 2 植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂 | 第41-46页 |
| 2.1 植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂 | 第42-43页 |
| 2.2 水稻中的植物半胱氨酸蛋白酶抑制剂 | 第43-46页 |
| 第二部分 研究论文 | 第46-111页 |
| 引言 | 第46-47页 |
| 一 水稻悬浮细胞增殖过程中胞外介质蛋白的分析 | 第47-83页 |
| 1 材料与试剂 | 第47页 |
| 1.1 植物材料 | 第47页 |
| 1.2 培养基及培养条件 | 第47页 |
| 1.3 质粒和菌种 | 第47页 |
| 1.4 引物合成及DNA 序列测定 | 第47页 |
| 1.5 主要试剂 | 第47页 |
| 2 实验方法 | 第47-56页 |
| 2.1 水稻愈伤组织诱导及继代 | 第47-48页 |
| 2.2 悬浮系的建立及状态检测 | 第48页 |
| 2.3 悬浮系细胞生长曲线的制作 | 第48页 |
| 2.4 不同天数悬浮介质中的胞外蛋白提取 | 第48页 |
| 2.5 蛋白质定量 | 第48-49页 |
| 2.6 苹果酸脱氢酶（MDH）活性的测定 | 第49页 |
| 2.7 蛋白电泳和免疫印迹检测 | 第49页 |
| 2.8 不同天数胞外蛋白对悬浮生长影响的测定 | 第49-50页 |
| 2.9 双向电泳 | 第50-51页 |
| 2.10 图像扫描及数据分析 | 第51页 |
| 2.11 差异蛋白点的质谱鉴定 | 第51-52页 |
| 2.12 RNA的提取及反转录生成cDNA | 第52-53页 |
| 2.13 外源片段的扩增 | 第53页 |
| 2.14 DNA 琼脂糖电泳和片段的回收 | 第53页 |
| 2.15 DNA片段的连接 | 第53-54页 |
| 2.16 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第54页 |
| 2.17 CaCl_2法转化大肠杆菌 | 第54页 |
| 2.18 碱裂解法小量提取质粒DNA | 第54页 |
| 2.19 DNA酶切 | 第54页 |
| 2.20 基因枪法转化洋葱表皮 | 第54-55页 |
| 2.21 实时荧光定量PCR | 第55-56页 |
| 3 实验结果 | 第56-76页 |
| 3.1 水稻悬浮系的建立及细胞的活性检测 | 第56页 |
| 3.2 水稻悬浮细胞生长曲线的制作 | 第56-57页 |
| 3.3 悬浮系胞外蛋白的提取及胞内污染的检测 | 第57-59页 |
| 3.4 不同胞外蛋白对于悬浮细胞生长的影响 | 第59-61页 |
| 3.5 双向电泳和质谱分析 | 第61-67页 |
| 3.5.1 pH 3-10 范围分析 | 第61-63页 |
| 3.5.2 pH 4-7 范围分析 | 第63-67页 |
| 3.6 亚细胞定位分析 | 第67-72页 |
| 3.6.1 相关载体构建 | 第67-70页 |
| 3.6.2 亚细胞定位观察 | 第70-72页 |
| 3.7 RNA水平表达分析 | 第72-74页 |
| 3.8 单向电泳和LC/MS-MS分析胞外介质蛋白 | 第74-76页 |
| 4 讨论 | 第76-83页 |
| 4.1 水稻悬浮培养细胞分泌蛋白的提取 | 第76-77页 |
| 4.2 质外体蛋白促进悬浮细胞增殖 | 第77-78页 |
| 4.3 双向电泳分离差异蛋白 | 第78-80页 |
| 4.4 亚细胞定位和RNA表达的分析 | 第80-81页 |
| 4.5 通过LC/MS-MS分析胞外介质蛋白 | 第81-83页 |
| 二 OsCP 和 OsCPI 的功能研究 | 第83-111页 |
| 1 材料与试剂 | 第83页 |
| 2 实验方法 | 第83-87页 |
| 2.1 农杆菌感受态细胞的制备 | 第83页 |
| 2.2 农杆菌的转化及鉴定 | 第83-84页 |
| 2.3 水稻组织培养和遗传转化 | 第84页 |
| 2.4 Southern Blot检测转基因植株T-DNA插入情况 | 第84-86页 |
| 2.5 悬浮系细胞鲜重和干重的测定 | 第86页 |
| 2.6 OsCPI重组蛋白的诱导表达 | 第86页 |
| 2.7 OsCPI的纯化 | 第86-87页 |
| 2.8 OsCPI的活性测定 | 第87页 |
| 2.9 纯化的OsCPI处理野生型水稻悬浮系 | 第87页 |
| 3 实验结果 | 第87-107页 |
| 3.1 OsCP和OsCPI结构与功能预测及分析 | 第87-91页 |
| 3.2 OsCP和OsCPI的组织表达分析 | 第91-92页 |
| 3.3 OsCP的功能分析 | 第92-100页 |
| 3.3.1 基因克隆载体构建 | 第92-94页 |
| 3.3.2 转基因鉴定 | 第94-97页 |
| 3.3.3 RNAi悬浮系表型观察 | 第97-98页 |
| 3.3.4 OsCP过表达植株表型观察 | 第98-100页 |
| 3.4 OsCPI的功能分析 | 第100-107页 |
| 3.4.1 OsCPI 转基因载体构建及鉴定 | 第100-101页 |
| 3.4.2 OsCPI的蛋白表达 | 第101-103页 |
| 3.4.3 纯化蛋白OsCPI的抑制活性 | 第103-104页 |
| 3.4.4 纯化蛋白OsCPI对悬浮细胞生长的影响 | 第104-107页 |
| 3.5 OsCP和OsCPI不能直接相互作用 | 第107页 |
| 4 讨论 | 第107-111页 |
| 4.1 OsCP的功能分析 | 第107-109页 |
| 4.2 OsCPI的功能分析 | 第109-110页 |
| 4.3 OsCP和OsCPI是否调节相同途径 | 第110-111页 |
| 结论 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-131页 |
| 个人简历 | 第131-132页 |
| 致谢 | 第132页 |
