摘要 | 第7-10页 |
Abstract | 第10-14页 |
第1章 综述 | 第15-33页 |
1.1 ENU诱导正向遗传筛选 | 第15-18页 |
1.2 肝脏发育 | 第18-21页 |
1.3 胰腺发育 | 第21-23页 |
1.4 肠道发育 | 第23-27页 |
1.5 核糖体合成 | 第27-30页 |
1.6 mTORC1信号通路 | 第30-33页 |
第2章 材料与方法 | 第33-53页 |
2.1 实验动物及饲养 | 第33页 |
2.2 试剂、耗材和仪器 | 第33-34页 |
2.3 培养基和主要试剂的配制 | 第34-37页 |
2.3.1 培养基的配制 | 第34页 |
2.3.2 各种缓冲液的配制 | 第34-35页 |
2.3.3 原位杂交相关溶液的配制 | 第35-36页 |
2.3.4 抗体显色相关溶液的配制 | 第36页 |
2.3.5 Western Blot 相关溶液的配制 | 第36页 |
2.3.6 Northern Blot | 第36-37页 |
2.3.7 其他溶液的配制 | 第37页 |
2.4 质粒和菌种 | 第37页 |
2.5 实验方法 | 第37-53页 |
2.5.1 ENU诱变 | 第37-38页 |
2.5.2 定位克隆 | 第38页 |
2.5.3 斑马鱼总RNA提取 | 第38-39页 |
2.5.4 基因组提取 | 第39页 |
2.5.5 反转录 cDNA 制备 | 第39页 |
2.5.6 重组质粒的构建 | 第39-42页 |
2.5.7 反义探针的制备 | 第42页 |
2.5.8 亚克隆连接 | 第42-43页 |
2.5.9 DNA纯化 | 第43页 |
2.5.10 胚胎注射 | 第43-44页 |
2.5.11 全胚胎原位杂交 | 第44-45页 |
2.5.12 荧光全胚原位杂交 | 第45-47页 |
2.5.13 抗体显色 | 第47页 |
2.5.14 细胞流式筛选 | 第47-48页 |
2.5.15 细胞凋亡实验 | 第48页 |
2.5.16 胚胎热激实验 | 第48-49页 |
2.5.17 药物处理实验 | 第49页 |
2.5.18 Western Blot | 第49-50页 |
2.5.19 蔗糖密度梯度离心 | 第50页 |
2.5.20 Northern Blot | 第50-51页 |
2.5.21 Luciferase assay | 第51页 |
2.5.22 O-propargyl-puromycin (OPP) assay | 第51-53页 |
第3章 实验结果 | 第53-67页 |
3.1 斑马鱼cq31突变体胚胎早期消化器官发育缺陷 | 第53-54页 |
3.2 urb1是cq31突变体的突变基因 | 第54-57页 |
3.3 斑马鱼Urb1蛋白对于早期消化器官的细胞增殖具有重要作用 | 第57-60页 |
3.4 Urb1作用于mTOR信号通路下游调控胚胎早期消化器官发育 | 第60-63页 |
3.5 Urb1作用于mTORC1信号通路下游调控核糖体亚基的组装以及蛋白质的合成 | 第63-67页 |
第4章 实验讨论 | 第67-71页 |
参考文献 | 第71-85页 |
致谢 | 第85-87页 |
博士在读期间发表论文及科研工作 | 第87页 |